| 丙型肝炎病毒基因组C区和NS3区基因cDNA的融合及其在大肠杆菌中的表达与初步应用 |
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| 引用本文： | 杨永平,江永珍,毕胜利,刘崇柏. 丙型肝炎病毒基因组C区和NS3区基因cDNA的融合及其在大肠杆菌中的表达与初步应用[J]. 病毒学报, 1994, 0(3) |
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| 作者姓名： | 杨永平 江永珍 毕胜利 刘崇柏 |
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| 作者单位： | 中国预防医学科学院病毒学研究所 |
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| 摘 要： | 通过逆转录（ＲＴ）－聚合酶链式反应（ＰＣＲ），从中国人丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）携带者的血清中扩增并克隆到２段ｃＤＮＡ片段，即ＨＣＶ基因组Ｃ区抗原基因Ｃ８３１ｃＤＮＡ片断（约５３０ｂｐ）和ＮＳ３区抗原基因Ｃ３３ｃｃＤＮＡ片段（约８６０ｂｐ）。Ｃ３３ｃｃＤＮＡ片段同Ｃ８３１ｃＤＮＡ片段经连接 肽Ｓｅｒ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ连接成为基因嵌合体Ｃ３３ｃ－Ｃ８３１（约１４００ｂｐ）。Ｃ３３ｃ－Ｃ８３１基因嵌合体同温控型原核表达载体ｐＢＶ２２０重组，构建成表达质粒ｐＢＶ／Ｃ３３ｃ－Ｃ８３１，并在大肠杆菌细胞中获得了重组嵌合抗原Ｃ３３ｃ－ＣＬ的表达。通过酶切分析和Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹法，对约占菌体可溶性蛋白９％的表达产物做了鉴定。采用ＴｒｉｔｏｎＸ－１００和盐析处理，获得粗提表达产物。粗提的表达产物经尿素裂解和离子交换层析纯化，得到可用于检测抗ＨＣＶ核壳蛋白和抗ＮＳ３区抗体的重组嵌合抗原Ｃ３３ｃ－ＣＬ。对Ｃ３３ｃ－ＣＬ做抗原性分析发现，它同时具有完整的Ｃ３３ｃ抗原和Ｃ２２抗原的免疫反应活性，完全能替代单纯的Ｃ３３ｃ和Ｃ２２抗原。该嵌合抗原在血清学诊断中有重要的应用价值，可望成为新一代ＨＣＶＥＩＡ诊断试剂的优选抗原。
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| 关 键 词： | 丙型肝炎病毒，基因cDNA融合，原核表达，丙型肝炎抗体检测 |
cDNA CHIMERIC FUSION AND PROKARYOTIC EXPRESSIONOF NUCLEOCAPSID AND NS3 REGIONS OF HEPATITIS CVIRUS GENOME AND ANALYSIS ITS ANTIGENICITY |
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| Yang Yongping Jiang Yongzhen Bi shengli Liu Chongbai. cDNA CHIMERIC FUSION AND PROKARYOTIC EXPRESSIONOF NUCLEOCAPSID AND NS3 REGIONS OF HEPATITIS CVIRUS GENOME AND ANALYSIS ITS ANTIGENICITY[J]. Chinese journal of virology, 1994, 0(3) |
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| Authors: | Yang Yongping Jiang Yongzhen Bi shengli Liu Chongbai |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Hepatitis C virus cDNA chimeric fusion Prokaryotic expression Anti-HCV assay |
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