| TAT-Cloan-DH-EGFP融合蛋白的原核表达及其在舞毒蛾幼虫体内的跨膜转导 |
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| 引用本文： | 周洲,李永丽,源春彦,曲良建. TAT-Cloan-DH-EGFP融合蛋白的原核表达及其在舞毒蛾幼虫体内的跨膜转导[J]. 昆虫学报, 2014, 57(12): 1361-1367 |
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| 作者姓名： | 周洲 李永丽 源春彦 曲良建 |
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| 作者单位： | (1. 河南科技大学林学院, 河南洛阳 471003; 2. 中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所, 北京100091) |
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| 摘 要： | 【目的】为了探究滞育激素经昆虫取食的生物效应, 需设计一种能够加速跨膜运输的融合蛋白, 克服经昆虫消化道的降解作用。【方法】本研究以分月扇舟蛾Clostera anastomosis滞育激素基因Cloan-DH和TAT穿膜肽编码序列为基础, 构建TAT-Cloan-DH融合基因; 然后以增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein, EGFP）为标签, 构建在pET-22b载体中。在0.2 mmol/L IPTG诱导下, 在大肠杆菌Escherichia coli BL21 Rosetta(DE3)中表达出TAT-Cloan-DH-EGFP融合蛋白。 再分别将表达有TAT-Cloan-DH-EGFP和EGFP融合蛋白的大肠杆菌BL21菌体拌入人工饲料，经舞毒蛾Lymantria dispar幼虫持续取食0, 8, 24, 48, 72和90 h后, 随机挑选试虫进行组织固定并制作石蜡切片, 选取中肠所在体段切片进行组织荧光分析。【结果】37℃ 0.2 mmol/L IPTG诱导条件下, 表达的TAT-Cloan-DH-EGFP融合蛋白的分子量为61 kD, 主要以包涵体形式表达, 融合蛋白约占细胞总蛋白含量的18.1%; 随着试虫取食含TAT-Cloan-DH-EGFP融合蛋白饲料的增加, 虫体组织的绿色荧光强度逐渐增加, 取食72 h后, 组织荧光强度达到最高。【结论】实验结果说明融合蛋白TAT-Cloan-DH-EGFP可以通过消化道横向跨膜运输, 到达虫体其他组织, 且该过程与蛋白的摄入量成比例。
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| 关 键 词： | 舞毒蛾 滞育激素 TAT穿膜肽 蛋白转导域 融合蛋白 跨膜运输 |
Prokaryotic expression of TAT-Cloan-DH-EGFP fusion protein and its transduction in larvae of the gypsy moth,Lymantria dispar (Lepidoptera: Lymantriidae) by oral administration |
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| ZHOU Zhou,LI Yong-Li,YUAN Chun-Yan,QU Liang-Jian. Prokaryotic expression of TAT-Cloan-DH-EGFP fusion protein and its transduction in larvae of the gypsy moth,Lymantria dispar (Lepidoptera: Lymantriidae) by oral administration[J]. Acta Entomologica Sinica, 2014, 57(12): 1361-1367 |
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| Authors: | ZHOU Zhou LI Yong-Li YUAN Chun-Yan QU Liang-Jian |
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| Affiliation: | (1. Forestry College, Henan University of Science and Technology, Luoyang, Henan 471003, China; 2. Research Institute of Forest Ecology, Environment and Protection, Chinese Academy of Forestry, Beijing 100091, China) |
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