| 中华蜜蜂OBP3基因的克隆、原核表达及组织表达谱 |
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| 引用本文： | 吉挺,沈芳,梁勤,吴黎明,刘振国,罗岳雄. 中华蜜蜂OBP3基因的克隆、原核表达及组织表达谱[J]. 昆虫学报, 2014, 57(8): 897-904 |
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| 作者姓名： | 吉挺 沈芳 梁勤 吴黎明 刘振国 罗岳雄 |
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| 作者单位： | （1. 扬州大学动物科学与技术学院， 江苏扬州225009； 2. 福建农林大学蜂学院， 福州 350002；3. 中国农业科学院蜜蜂研究所， 北京 100093； 4. 广东省昆虫研究所， 广州 510260） |
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| 摘 要： | 【目的】气味结合蛋白质（odorant binding proteins, OBPs）参与气味分子的识别，在蜜蜂嗅觉中扮演重要的角色。本研究旨在克隆中华蜜蜂 Apis cerana cerana OBP3基因，以制备多克隆抗体。【方法】运用RT-PCR技术从中华蜜蜂头部总RNA中扩增OBP3基因，将该基因亚克隆入原核表达载体pET-28a并转入大肠杆菌Escherichia coli Rosetta (DE3)中诱导表达获得融合蛋白质，融合蛋白质经纯化后免疫新西兰白兔制备多克隆抗体，最后分别用间接ELISA和Western Blot检测抗体的效价和特异性，并采用荧光定量PCR检测OBP3基因在中蜂不同组织中的表达。【结果】克隆得到了中华蜜蜂OBP3基因AccOBP3（GenBank登录号KJ026357），大小为444 bp。 SDS-PAGE结果显示融合蛋白成功表达。制备的多克隆抗体效价高于1∶40 000，且具有很高的特异性。荧光定量PCR结果表明，AccOBP3基因在腿部和触角中显著高表达（P<0.01），胸部中次之（P<0.01），头部和腹部中显著低表达，后两者表达量差异不显著（P>0.05）。【结论】OBP3基因在中蜂触角有高转录活性。本研究实现了中蜂OBP3基因的原核表达，并制备了兔抗中蜂OBP3多克隆抗体，为深入研究中蜂OBP3基因的功能奠定基础 。
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| 关 键 词： | 中华蜜蜂 OBP3基因 基因克隆 原核表达 组织表达谱 抗体制备 |
Cloning,prokaryotic expression and tissue expression profiling of an OBP3 gene in the Chinese honeybee,Apis cerana cerana (Hymenoptera: Apidae) |
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| JI Ting,SHEN Fang,LIANG Qin,WU Li-Ming,LIU Zhen-Guo,LUO Yue-Xiong. Cloning,prokaryotic expression and tissue expression profiling of an OBP3 gene in the Chinese honeybee,Apis cerana cerana (Hymenoptera: Apidae)[J]. Acta Entomologica Sinica, 2014, 57(8): 897-904 |
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| Authors: | JI Ting SHEN Fang LIANG Qin WU Li-Ming LIU Zhen-Guo LUO Yue-Xiong |
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| Affiliation: | (1.College of Animal Science and Technology, Yangzhou University ,Yangzhou, Jiangsu 225009, China; 2.College of Bee Science, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou 350002, China; 3.Institute of Apiculture Research, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100093, China; 4.Guangdong Entomological Institute, Guangzhou 510260, China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Apis cerana cerana OBP3 gene gene cloning prokaryotic expression tissue expression profiles antibody preparation |
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