| 嗜酸古菌Cuniculiplasma divulgatum来源的GH1家族中温β-葡萄糖苷酶CdBglA的原核表达及酶学性质分析 |
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| 作者姓名： | 何金见 沈风飞 刘鑫涵 杨天均 李宝通 石鹏君 刘慧芹 曾婉宁 |
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| 作者单位： | 天津农学院园艺园林学院, 天津 300392;江西中洪博元生物技术有限公司, 江西 南昌 330200;绥江县兴邦农业开发有限公司, 云南 昭通 657700;中国农业科学院麻类研究所, 湖南 长沙 410205 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(32072166);新疆维吾尔自治区二次引进项目(2022008);中国农业科学院农业科技创新专项基金(ASTIP-IBFC);宁夏回族自治区特殊生境微生物资源开发与利用重点实验室开放课题(2019TSWZ01);天津市研究生科研创新项目(2022SKYZ073) |
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| 摘 要： | 葡萄糖苷酶在食品、医药、生物质转化等领域具有重要的应用价值,因此发掘适应性强、性质优良的β-葡萄糖苷酶是国内外研究的热点。本文对尚未报道的来源于嗜酸古菌(Cuniculiplasmadivulgatum)GH1家族的葡萄糖苷酶进行了克隆表达和酶学性质测定,以期找到更优的β-葡萄糖苷酶。从NCBI数据库中获取了C. divulgatum来源的GH1葡萄糖苷酶氨基酸序列,然后制备重组质粒pET-30a(+)-CdBglA,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达重组蛋白,对纯化后的CdBglA进行酶学性质研究。结果发现,重组酶CdBglA的分子量为56.0 kDa,最适pH为5.5,最适温度为55℃。该酶具有良好的pH稳定性,在pH 5.5-11.0范围内处理1 h,仍维持92.33%以上的酶活力。以p NPG为底物时的酶促反应动力学参数Km、Vmax和Kcat/Km分别为0.81 mmol、291.99μmol/(mg·min)和387.50s-1mmol-1。其在终浓度5mmol/L重金属离子的影响下均能保持90.33%以上的酶活力;在15%的乙醇溶液中酶活力被提高了28.67%,在2...
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| 关 键 词： | 嗜酸古菌 GH1家族 β-葡萄糖苷酶 乙醇耐受性 酶学性质 |
| 收稿时间： | 2023-04-18 |
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