布氏锥虫自噬蛋白ATG12的表达、纯化及二级结构预测 |
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引用本文: | 王瑞,崔冲,郑伟,涂晓明.布氏锥虫自噬蛋白ATG12的表达、纯化及二级结构预测[J].生物技术,2022(2):146-152. |
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作者姓名: | 王瑞 崔冲 郑伟 涂晓明 |
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作者单位: | 1.河南科技大学基础医学院471023;2.洛阳船舶材料研究所双瑞特装有限公司471000;3.中国科学技术大学合肥微尺度实验室230026; |
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基金项目: | 河南科技大学博士启动基金项目(4020/13480038);国家自然科学基金面上项目(31270780)。 |
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摘 要: | 目的]表达纯化布氏锥虫自噬蛋白TbATG12,并对其二级结构进行预测。方法]克隆TbATG12编码序列,采用酶切连接方法构建表达载体TbATG12(pET-28a),转化进入BL21(DE3)表达菌株诱导蛋白表达,利用Ni^(2+)-NAT亲和层析及分子筛层析方法纯化蛋白。采用核磁手段,采集一维和二维谱图,利用JPred 4预测其二级结构。结果]16℃、0.5 mmol/L IPTG诱导20 h,TbATG12以可溶蛋白形式存在。纯化后蛋白纯度可达95%。TbATG12谱峰分布均匀,强度较强,二级结构预测其含有3个α-螺旋和5个β-折叠,为后续解析TbATG12溶液结构提供指导。结论]克隆、表达纯化得到纯度>95%可溶TbATG12蛋白,二级结构预测和比对发现其结构在进化上很保守。
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关 键 词: | 布氏锥虫 TbATG12 自噬 蛋白表达纯化 二级结构 保守结构 |
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