| 链格孢ATMT转化体系的构建及弱毒突变株验证 |
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| 引用本文： | 徐后娟,徐荣燕,李多川.链格孢ATMT转化体系的构建及弱毒突变株验证[J].基因组学与应用生物学,2009,28(6). |
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| 作者姓名： | 徐后娟 徐荣燕 李多川 |
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| 作者单位： | 山东农业大学植物保护学院,泰安,271018 |
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| 摘 要： | 本文利用来自质粒pUCATPH的构巢曲霉色氨酸合成基因trpC的启动子(PtrpC)、终止子(Ttrpc)和潮霉素磷酸转移酶抗性基因(hph)以及植物表达载体pROK Ⅱ成功构建了适用于丝状真菌的根癌农杆菌介导转化的双元载体pROKIIHPH,并转化根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens LBA4404,建立了根癌农杆菌LBA4404介导的链格孢Alternaria alternata分生孢子转化体系;再从乙酰丁香酮(AS)浓度、不同的共培养时间、受体菌分生孢子浓度和农杆菌菌液浓度对A.alternata转化效率的影响对体系进行优化.结果确定了根癌农杆菌菌液体积为200 mL(OD_(600)=0.15),A.alternata分生孢子浓度为10~6个/mL,在A.tumefaciens的预培养时期以及与A.alternata共培养时期分别加入200 μmol/LAS,共培养时间48 h,转化率达120～200个/10~5分生孢子.在所筛选的约800个转化子中获得了1株毒性明显低于野生菌sd1的弱毒突变株t108,通过PCR验证推测其毒力降低可能由于T-DNA插入阻断了基因的表达.该实验结果为与突变相关基因的研究以及弱毒株t108的进一步研究和利用提供了实验材料,也为深入研究链格孢sd1菌株的基因功能奠定了基础.
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| 关 键 词： | 链格孢 根癌农杆菌 双元载体 |
Agrobacterium tumefaciens-mediated Transformation of Alternaria alternata and Identification of Hypovirulent Mutant |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | ATMT |
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