| 一种新的遍在蛋白融合基因Uba256的克隆及表达 |
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| 引用本文： | 李朝飞,李充譬,汤慕瑾,尹崇,龚映雪,庞义.一种新的遍在蛋白融合基因Uba256的克隆及表达[J].生物化学与生物物理学报,2003,35(4):360-365. |
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| 作者姓名： | 李朝飞 李充譬 汤慕瑾 尹崇 龚映雪 庞义 |
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| 作者单位： | 中山大学生物防治国家重点实验室、昆虫学研究所 广州510275
(李朝飞，李充璧，汤慕瑾，尹崇，龚映雪)，中山大学生物防治国家重点实验室、昆虫学研究所 广州510275(庞义) |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目 (No .3 0 170 0 40 )~~ |
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| 摘 要： | 斜纹夜蛾核多角体病毒 (Spodopteralituramulticapsidnucleopolyhedrovirus ,SpltMNPV)的Uba2 5 6基因是已知昆虫病毒基因组中惟一编码遍在蛋白与GP37融合蛋白的基因。通过PCR方法扩增得到该基因及其N端的遍在蛋白编码区与C端的GP37编码区。将这 3个基因片段分别克隆至质粒pBV2 2 0与pQE30 ,构建得到重组质粒pB VUBCP、pQEUB与pQECP。pBVUBCP转化大肠杆菌DH5α ,经热激诱导表达了一条 38kD的蛋白带 ,证明Uba2 5 6表达的蛋白在大肠杆菌中没有发生剪切。pQEUB、pQECP转化大肠杆菌M15 ,经IPTG诱导 ,Western印迹分析结果表明遍在蛋白与GP37蛋白获得高效表达。以Ni2 NTA偶联抗体检测证明所表达的蛋白质均为融合蛋白质。纯化的融合蛋白质免疫新西兰大白兔可诱导产生特异抗体。ELISA和Western印迹检测结果显示 ,SpltMNPV遍在蛋白抗体及GP37抗体均与表达的融合蛋白质呈阳性反应 ,表明所表达的融合蛋白质仍保持原有蛋白质的免疫原性。以获得的抗体对感染SpltMNPV 72h的Sl zsu 1细胞进行检测 ,发现仅有一条 34kD的蛋白质带与GP37抗体发生特异反应 ;而有 4条分子量分别为 14、2 4、33、5 1kD的蛋白质带与遍在蛋白抗体发生特异反应 ,表明Uba2 5 6基因表达的蛋白质在宿主细胞内发生了剪切。
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| 关 键 词： | 斜纹夜蛾核多角体病毒 遍在蛋白-GP37融合蛋白基因 基因表达 |
Cloning and Expression of a Novel Ubiquitin Fusion Gene Uba256 |
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| LI Zhao-Fei,LI Chong-Bi,TANG Mu-Jing,YIN Chong,GONG Ying-Xue,PANG Yi.Cloning and Expression of a Novel Ubiquitin Fusion Gene Uba256[J].Acta Biochimica et Biophysica Sinica,2003,35(4):360-365. |
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| Authors: | LI Zhao-Fei LI Chong-Bi TANG Mu-Jing YIN Chong GONG Ying-Xue PANG Yi |
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| Institution: | LI Zhao-Fei,LI Chong-Bi,TANG Mu-Jing,YIN Chong,GONG Ying-Xue,PANG Yi * |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Spodoptera litura nucleopolyhedrovirus ubiquitin-GP37 fusion protein gene gene expression |
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