低毒且高效杀伤人肿瘤细胞的新型人肿瘤 |
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作者姓名: | 刘惠 卢芳 陈建军 任红玉 陈常庆 |
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作者单位: | 刘惠(中国科学院上海生命科学院生物工程研究中心,上海,200233);卢芳(中国科学院上海生命科学院生物工程研究中心,上海,200233);陈建军(中国科学院上海生命科学院生物工程研究中心,上海,200233);任红玉(中国科学院上海生命科学院生物工程研究中心,上海,200233);陈常庆(中国科学院上海生命科学院生物工程研究中心,上海,200233) |
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基金项目: | "863"高技术计划资助项目(批准号: 103-13-01-04) |
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摘 要: | 采用定点突变的方法构建了两株新型人肿瘤坏死因子突变体MT1 (32Trp157Phe)和MT2(2Lys30Ser32Trp157Phe), 并在大肠杆菌中得以高效表达, 表达量占菌体总蛋白的50%且为可溶性蛋白. 表达产物经蛋白印渍法检测, 均能与抗野生型hTNF-a单抗结合且经分离纯化后样品的纯度在95%以上. 各突变体虽然对鼠成纤维瘤细胞L929的生物学活性比野生型下降了4~5个数量级, 但却能高效杀伤人肿瘤细胞, 杀伤程度与野生型相差不明显. 测定突变体MT1的LD50值降至野生型的0.34%, 而MT2对小鼠30%致死剂量则低于野生型LD50的1/700.
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关 键 词: | 定点突变 细胞毒活性 蛋白印渍 LD50 人肿瘤坏死因子 |
收稿时间: | 2001-07-29 |
修稿时间: | 2001-07-29 |
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