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低毒且高效杀伤人肿瘤细胞的新型人肿瘤
作者姓名:刘惠 卢芳 陈建军 任红玉 陈常庆
作者单位:刘惠(中国科学院上海生命科学院生物工程研究中心,上海,200233);卢芳(中国科学院上海生命科学院生物工程研究中心,上海,200233);陈建军(中国科学院上海生命科学院生物工程研究中心,上海,200233);任红玉(中国科学院上海生命科学院生物工程研究中心,上海,200233);陈常庆(中国科学院上海生命科学院生物工程研究中心,上海,200233)
基金项目:"863"高技术计划资助项目(批准号: 103-13-01-04)
摘    要:采用定点突变的方法构建了两株新型人肿瘤坏死因子突变体MT1 (32Trp157Phe)和MT2(2Lys30Ser32Trp157Phe), 并在大肠杆菌中得以高效表达, 表达量占菌体总蛋白的50%且为可溶性蛋白. 表达产物经蛋白印渍法检测, 均能与抗野生型hTNF-a单抗结合且经分离纯化后样品的纯度在95%以上. 各突变体虽然对鼠成纤维瘤细胞L929的生物学活性比野生型下降了4~5个数量级, 但却能高效杀伤人肿瘤细胞, 杀伤程度与野生型相差不明显. 测定突变体MT1的LD50值降至野生型的0.34%, 而MT2对小鼠30%致死剂量则低于野生型LD50的1/700.

关 键 词:定点突变  细胞毒活性  蛋白印渍  LD50  人肿瘤坏死因子
收稿时间:2001-07-29
修稿时间:2001-07-29
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