| 人Nek2蛋白原核表达纯化及其多克隆抗体制备 * |
| |
| 引用本文： | 陈秋利,杨丽超,李辉,温莎,李刚,何敏.人Nek2蛋白原核表达纯化及其多克隆抗体制备 *[J].中国生物工程杂志,2020,40(3):31-37. |
| |
| 作者姓名： | 陈秋利 杨丽超 李辉 温莎 李刚 何敏 |
| |
| 作者单位： | 1 广西医科大学公共卫生学院 南宁 5300002 广西医科大学实验动物中心 南宁 530000 |
| |
| 基金项目： | * 国家自然科学基金(81760612);广西重点研发项目(桂科AB16380351) |
| |
| 摘 要： | 目的通过原核表达系统表达人Nek2蛋白,优化表达条件并纯化Nek2蛋白,制备抗Nek2多克隆抗体.方法 将Nek2基因片段构建到原核表达载体pET30a(+)上,转化大肠杆菌BL21 (DE3);加入诱导剂IPTG诱导表达,对诱导温度,诱导剂IPTG终浓度,诱导时间等条件进行优化;利用12% SDS-PAGE后250mmol/L KCl染色切胶纯化蛋白质,将纯化后的Nek2蛋白进行质谱鉴定;纯化Nek2蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,运用ELISA,Western blot和免疫荧光实验检测多克隆抗体效价和特异性.结果 构建了pET30a(+)-Nek2重组原核表达质粒,诱导的重组人Nek2蛋白主要以包涵体的形式存在;蛋白质的最适诱导表达条件为28℃,180r/min条件下加入终浓度为0.2mmol/L IPTG诱导32h;质谱分析纯化后的蛋白质为Nek2蛋白,最终获得浓度为1.35mg/ml纯化后的Nek2蛋白;纯化蛋白免疫小鼠,多克隆抗体效价大于1∶243 000,且具有良好的抗原特异性;免疫荧光实验显示Nek2主要定位于细胞质和细胞核.结论: 利用重组人Nek2蛋白获得具有良好抗原特异性的抗Nek2多克隆抗体.
|
| 关 键 词： | Nek2 原核表达 多克隆抗体 KCl染色 |
| 收稿时间： | 2019-08-30 |
Prokaryotic Expression,Purification and Preparation of Polyclonal Antibody of Human Nek2 Protein |
| |
| CHEN Qiu-li,YANG Li-chao,LI Hui,WEN Sha,LI Gang,HE Min.Prokaryotic Expression,Purification and Preparation of Polyclonal Antibody of Human Nek2 Protein[J].China Biotechnology,2020,40(3):31-37. |
| |
| Authors: | CHEN Qiu-li YANG Li-chao LI Hui WEN Sha LI Gang HE Min |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | Nek2 Prokaryotic expression Polyclonal antibody KCl stain |
|
| 点击此处可从《中国生物工程杂志》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《中国生物工程杂志》下载免费的PDF全文 |
|
