小鼠及猕猴胚胎MECP2基因T158M单碱基突变体系的建立 |
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引用本文: | 周勤,王爽,张婷,李善刚,陈永昌.小鼠及猕猴胚胎MECP2基因T158M单碱基突变体系的建立[J].中国生物工程杂志,2020,40(6):31-39. |
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作者姓名: | 周勤 王爽 张婷 李善刚 陈永昌 |
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作者单位: | 1 昆明理工大学生命科学与技术学院 灵长类转化医学研究院 昆明 6505002 云南中科灵长类生物医学重点实验室 昆明 650500 |
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基金项目: | * 国家自然科学基金(U1602224) |
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摘 要: | 目的:利用单碱基编辑技术定点修饰MECP2基因T158M位点,获得单一定点突变类型的啮齿类及非人灵长类胚胎,为建立模拟临床上Rett综合征的疾病动物模型奠定基础。方法:利用单碱基编辑技术构建3对T158M-sgRNA质粒,并分别与BE系统(BE3或BE4max)质粒共转染293T细胞筛选高效的sgRNA,通过显微注射将体外转录的mRNA以不同的浓度组合注射到ICR小鼠和猕猴受精卵中,检测小鼠和猕猴胚胎发育率和编辑效率,评估BE3和BE4max的工作效率及最优浓度组合。结果:小鼠胚胎上BE4max(ng/μl)∶sgRNA(ng/μl)=100∶50浓度组合时,小鼠胚胎发育率和编辑效率最佳,同时该浓度组合在猕猴胚胎上也获得了有效编辑效率。结论:成功在小鼠及猕猴胚胎上实现了MECP2基因T158M位点上C→T的转变,为后期建立T158M突变的RTT动物模型建立了稳定的胚胎编辑体系。
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关 键 词: | Rett综合征 单碱基编辑 非人灵长类 编辑效率 |
收稿时间: | 2020-01-26 |
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