| 热稳定性丙酮酸:铁氧还蛋白氧化还原酶异源表达及其在乙酰辅酶A合成中的应用 * |
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| 引用本文： | 乐易林,傅毓,倪黎,孙建中. 热稳定性丙酮酸:铁氧还蛋白氧化还原酶异源表达及其在乙酰辅酶A合成中的应用 *[J]. 中国生物工程杂志, 2020, 40(3): 72-78. DOI: 10.13523/j.cb.1908013 |
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| 作者姓名： | 乐易林 傅毓 倪黎 孙建中 |
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| 作者单位： | 江苏大学环境与安全工程学院 生物质能源研究所 镇江 212013 |
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| 基金项目： | * 国家自然科学基金(31772529);国家重点科技项目(2018YF0107100) |
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| 摘 要： | 乙酰辅酶A被广泛应用到生物医学研究中,使用TPP代替昂贵的ATP为辅因子合成乙酰辅酶A受到广泛关注.新阿波罗栖热袍菌(Thermotoga neapolitana)来源的丙酮酸:铁氧还蛋白氧化还原酶(TnPFOR)在大肠杆菌中进行了重组表达,分析了其酶学特性,并探讨了利用嗜热酶(TnPFOR)酶法合成乙酰辅酶A.采用pET-20b(+)载体,将新阿波罗栖热袍菌来源的四亚基组成的嗜热酶(TnPFOR)在大肠杆菌中进行异源表达;通过热处理和阴离子交换层析法纯化嗜热酶(TnPFOR);重组表达的嗜热酶(TnPFOR)的最适反应温度和pH分别为90℃和6.5,TnPFOR在90℃下孵育1h时保留了50%活性.利用嗜热酶(TnPFOR),以TPP为辅酶合成了乙酰辅酶A,并探讨了不同温度,丙酮酸钠底物浓度和反应时间对乙酰辅酶A合成的影响.得到的优化条件为:最适反应温度为90℃,丙酮酸钠浓度为1.5mmol/L,反应时间为2min.
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| 关 键 词： | 大肠杆菌 重组表达 嗜热酶 嗜热菌 合成乙酰辅酶A |
| 收稿时间： | 2019-08-06 |
Expression and Characterization of a Thermostable Pyruvate Ferredoxin Oxidoreductase from the Hyperthermophile Thermotoga neapolitana and Its Application in Acetyl-CoA Production |
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| LE Yi-lin,FU Yu,NI Li,SUN Jian-zhong. Expression and Characterization of a Thermostable Pyruvate Ferredoxin Oxidoreductase from the Hyperthermophile Thermotoga neapolitana and Its Application in Acetyl-CoA Production[J]. China Biotechnology, 2020, 40(3): 72-78. DOI: 10.13523/j.cb.1908013 |
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| Authors: | LE Yi-lin FU Yu NI Li SUN Jian-zhong |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Escherichia coli Recombinant expression Thermophilic enzyme Thermophiles Synthesis of acetyl-CoA |
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