| HCV5＇端非编码区cDNA的体外转录 |
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| 引用本文： | 李刚,姚集鲁,彭文伟,王斌,陈青. HCV5＇端非编码区cDNA的体外转录[J]. Virologica Sinica, 1996, 0(4) |
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| 作者姓名： | 李刚 姚集鲁 彭文伟 王斌 陈青 |
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| 作者单位： | 中山医科大学传染病学教研室，中山医科大学免疫学教研室 |
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| 摘 要： | 采用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）从广东省一例慢性丙型肝炎病人血清中获得丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）５＇端非编码区（５＇ＮＣＲ）３０２ｂｐ的ｃＤＮＡ片段，经补齐和提纯后插入ｐＵＣ１９质粒，获得的重组体ｐＵＮ进行序列测定。将ｐＵＮ的目的基因亚克隆进体外转录载体ｐＳＰＯＲＴＩ多克隆位点的ＥｏｏＲＩ和ＰｓｔＩ切点之间，所得重组体ｐＳＮ线性化后由Ｔ＿７ＲＮＡ多聚酶及ＳＰ６ＲＮＡ多聚酶引导体外转录反应，产物经凝胶电泳及特异引物ＲＴ－ＰＣＲ，证实ＳＰ６引导的是正义ＲＮＡ，Ｔ７合成的是反义ＲＮＡ，其大小分别力４２９ｂｐ和３６２ｂｐ。并证实所得ＲＮＡ力ＨＣＶ５＇ＮＣＲｃＤＮＡ转录而来。获得的ＨＣＶ５＇ＮＣＲｃＤＮＡ和ＲＮＡ在常规逆转录和ＰＣＲ步骤中用于设立有效的模板对照，对消除假用性及评估试剂有重要意义。同时，ＨＣＶ５＇ＮＣＲ体外转录载体的构建可用于制各ＲＮＡ探针和反义ＲＮＡ，改进后还可作为定量ＰＣＲ的竞争性模板。
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| 关 键 词： | 丙型肝炎病毒，分子克隆，DNA序列测定，体外转录 |
In Vitro Transcription of HCV 5'Non-Coding Region cDNA |
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| Li Gang,Yao Jilu, Peng Wenwei et al. In Vitro Transcription of HCV 5'Non-Coding Region cDNA[J]. 中国病毒学(英文版), 1996, 0(4) |
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| Authors: | Li Gang Yao Jilu Peng Wenwei et al |
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