| PEG定点修饰重组人睫状神经营养因子及其生物活性评价 |
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| 引用本文： | 冯翠,王祺,张纯,秦培勇,郑秀玉,王健,刘永东,苏志国.PEG定点修饰重组人睫状神经营养因子及其生物活性评价[J].中国生物工程杂志,2015,35(5):15-21. |
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| 作者姓名： | 冯翠 王祺 张纯 秦培勇 郑秀玉 王健 刘永东 苏志国 |
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| 作者单位： | 1. 北京化工大学生命科学与技术学院 北京 100029;
2. 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室 北京 100190;
3. 北京生物制品研究所有限责任公司 北京 100024 |
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| 摘 要： | 采用分子质量为40k Da的马来酰亚胺聚乙二醇(m PEG-MAL),对重组人睫状神经营养因子突变体CNTF-C17的第17位半胱氨酸巯基进行定点修饰,通过离子交换层析获得单修饰产物Mono-PEG-CNTF-C17,并对其结构及体内外活性进行评价。实验结果表明,在p H 7.5的Tris-HCl缓冲液体中,蛋白质与修饰剂的为1∶3,4℃下反应12h,修饰率可达到90%以上,修饰混合物通过一步阴离子交换层析可获得纯度98%以上的单修饰产物。荧光光谱(FL)及圆二色(CD)图谱显示Mono-PEG-CNTF-C17与原蛋白二、三级结构一致。TF-1.CN5a.1细胞增殖活性检测表明,MonoPEG-CNTF-C17的比活达到了6.51×105IU/mg,体内循环半衰期相对原蛋白显著提高了30.3倍。该研究可为开发CNTF长效产品提供基础。
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| 关 键 词： | 马来酰亚胺聚乙二醇 CNTF-C12单修饰物 重组人睫状神经营养因子 分离纯化 |
| 收稿时间： | 2014-11-11 |
Preparation of mPEG-MAL-modified Recombinant Human Ciliary Neurotrophic Factor and Evaluation of Biological Activity |
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| FENG Cui,WANG Qi,ZHANG Chun,QIN Pei-yong,ZHANG Xiu-yu,WANG Jian,LIU Yong-dong,SU Zhi-guo.Preparation of mPEG-MAL-modified Recombinant Human Ciliary Neurotrophic Factor and Evaluation of Biological Activity[J].China Biotechnology,2015,35(5):15-21. |
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| Authors: | FENG Cui WANG Qi ZHANG Chun QIN Pei-yong ZHANG Xiu-yu WANG Jian LIU Yong-dong SU Zhi-guo |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | mPEG-MAL Mono-PEG-CNTF-C17 Recombinant human ciliary neurotrophic factor Separation and purification |
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