| 利用GAP启动子在毕赤酵母中表达与纯化GLP-1类似物 |
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| 引用本文： | 钱凯,张晶晶,吴素平,蔡燕飞,陈蕴,金坚.利用GAP启动子在毕赤酵母中表达与纯化GLP-1类似物[J].中国生物工程杂志,2015,35(5):66-73. |
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| 作者姓名： | 钱凯 张晶晶 吴素平 蔡燕飞 陈蕴 金坚 |
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| 作者单位： | 1. 江南大学生物工程学院 无锡 214122;
2. 江南大学药学院 无锡 214122 |
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| 基金项目： | 国家"863"计划(2014AA021003)、中科院先导计划(XDA01040202)资助项目 |
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| 摘 要： | 胰高血糖素样肽-1(GLP-1)能提高II型糖尿病患者β胰腺细胞的胰岛素分泌量并能促进β胰腺细胞增殖,是潜在的糖尿病治疗药物。设计一种GLP-1类似物AGGH,即GLP-1(A2G)的二联体与人血清白蛋白(HSA)的N端连接,并在融合蛋白GGH前添加一个丙氨酸(A)。PCR获得融合基因aggh,将融合基因连接到p GAPZαA质粒中。在酵母中利用甘油醛三磷酸脱氢酶(GAP)启动子组成型表达外源蛋白AGGH。研究结果显示:筛选获得表达重组菌株,基因组PCR和western-blot验证正确;以葡萄糖为最优碳源培养下,表达量达到68 mg/L;5 L发酵罐中,发酵52 h蛋白产量最高达238 mg/L。蛋白经四步纯化后,获得纯度为95.8%的AGGH融合蛋白。与利用醇氧化酶1(AOX1)启动子表达的AGGH比较,发现两者产量和活性没有明显差异。但是,GAP启动子表达获得AGGH融合蛋白更加方便,且发酵时间减少了27.8%(20 h)。
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| 关 键 词： | 毕赤酵母 GLP-1类似物 GAP启动子 |
| 收稿时间： | 2015-01-13 |
Constituted expression and purification of glucagon-like peptide-1 analogue in Pichia pastoris using GAP promoter |
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| QIAN Kai,ZHANG Jing-jing,WU Su-ping,CAI Yan-fei,CHEN Yun,JIN Jian.Constituted expression and purification of glucagon-like peptide-1 analogue in Pichia pastoris using GAP promoter[J].China Biotechnology,2015,35(5):66-73. |
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| Authors: | QIAN Kai ZHANG Jing-jing WU Su-ping CAI Yan-fei CHEN Yun JIN Jian |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Pichia pastoris GLP-1 analogue GAP promoter |
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