| 菜豆环氧化物水解酶的表达及其催化特性研究 |
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| 引用本文： | 石小玲,阚婷婷,李闯,宗迅成,邬敏辰. 菜豆环氧化物水解酶的表达及其催化特性研究[J]. 微生物学通报, 2018, 45(4): 797-804 |
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| 作者姓名： | 石小玲 阚婷婷 李闯 宗迅成 邬敏辰 |
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| 作者单位： | 1. 江南大学药学院 江苏 无锡 214122,1. 江南大学药学院 江苏 无锡 214122,2. 江南大学生物工程学院 江苏 无锡 214122,2. 江南大学生物工程学院 江苏 无锡 214122,3. 江南大学无锡医学院 江苏 无锡 214122 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(21676117)；江苏省普通高校研究生科研创新计划项目(SJZZ16_0217，KYLX16_0804) |
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| 摘 要： | 【背景】光学纯环氧化物及邻二醇是一类多功能手性砌块。与化学合成法相比,环氧化物水解酶(EHs)介导的生物转化法因环境友好而成为当前的研究热点。【目的】从菜豆(Phaseolus vulgaris)中克隆一种EH基因并进行原核表达,研究重组酶催化环氧苯乙烷(Styrene oxide,SO)的水解特性。【方法】通过计算机辅助分析EHs的一级结构,推测一种菜豆来源的未知功能蛋白(PvEH4)可能具有EH活性。利用RT-PCR技术,以菜豆总RNA为模板,扩增编码PvEH4的基因pveh4,并实现其在Escherichia coli BL21(DE3)中的表达。利用重组菌E.coli/pveh4全细胞催化SO水解,分析PvEH4的对映选择性和区域选择性。【结果】一级结构分析表明,PvEH4具有α/β折叠型EH特有的保守区域。SDS-PAGE结果显示PvEH4的表观分子量为39.4 kD。PvEH4针对SO的对映选择率(E值)为10.1,区域选择性系数αS和βR分别为99.5%和82.5%。当外消旋SO转化率达到68.1%时,可同时获得99.9%ees的(R)-SO和92.3%eep的(R)-苯乙二醇(Phenyl-1,2-ethanediol,PED),两者的产率分别为31.9%和65.6%。【结论】PvEH4的挖掘不仅增加了植物类EHs的数量,同时也为EHs的蛋白分子改造提供参考。
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| 关 键 词： | 菜豆，环氧化物水解酶，对映选择性，区域选择性，不对称水解 |
Expression and characterization of Phaseolus vulgaris epoxide hydrolase |
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| SHI Xiao-Ling,KAN Ting-Ting,LI Chuang,ZONG Xun-Cheng and WU Min-Chen. Expression and characterization of Phaseolus vulgaris epoxide hydrolase[J]. Microbiology China, 2018, 45(4): 797-804 |
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| Authors: | SHI Xiao-Ling KAN Ting-Ting LI Chuang ZONG Xun-Cheng WU Min-Chen |
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| Affiliation: | 1. School of Pharmaceutical Sciences, Jiangnan University, Wuxi, Jiangsu 214122, China,1. School of Pharmaceutical Sciences, Jiangnan University, Wuxi, Jiangsu 214122, China,2. School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi, Jiangsu 214122, China,2. School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi, Jiangsu 214122, China and 3. Wuxi Medical School, Jiangnan University, Wuxi, Jiangsu 214122, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Phaseolus vulgaris Epoxide hydrolase Enantioselectivity Regioselectivity Asymmetric hydrolysis |
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