PCR在鸭瘟临床诊断和免疫及致病机理研究中的初步应用

根据GenBank文献，应用Oligo 6．0分析软件合成了用于扩增鸭瘟病毒(duck plague virus，DPV)EcoR Ⅰ 765bp片段的1对引物，上游引物(P1)位于EcoR Ⅰ片段的246～266nt，下游引物(P2)位于EcoR Ⅰ片段的727～744nt，以DPV CHa株DNA为模板，筛选PCR最佳反应条件，建立了检测DPV的PCR方法。应用该方法对强毒株DPV鸭胚培养物和弱毒株的鸡胚培养物进行扩增，均可获得498bp的DNA片段。而对正常鸭(鸡)胚和鸡马立克氏病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、鸭病毒性肝炎病毒、多杀性巴氏杆菌、大肠杆菌、鸭副伤寒沙门氏菌和鸭疫里默氏杆菌培养物进行检测，结果均呈阳性。扩增产物测序结果与文献报道一致，证明了PCR方法的特异性。对DPV CHa株鸡胚毒提取物DNA进行检测，其最低检出量为10fg。用病毒分离、Dot—ELISA和PCR三种方法分别检测1990～2002年期间送检的临床样品，对所获得的结果进行χ^2分析，证明PCR检出率明显高于前2种方法。CHa株免疫雏鸭后对血液、心、肝、脾、肺、肾、十二指肠、直肠、法氏囊、胸腺、胰腺、延脑、大脑、小脑、舌头、肌肉、骨髓、食道共18种组织和粪便进行PCR检测，结果表明：①皮下接种4h后，心、肝、脾、肾、法氏囊、胸腺、胰腺、延脑、大脑和小脑为阳性，8h后18种组织和粪便均为阳性；②口服接种4h后舌头和食道为阳性，8h后，心、肝、脾、肾、胸腺、胰腺、延脑、大脑、小脑、舌头、食道和血液均为阳性；③滴鼻接种4h后无阳性组织，8h后检测心、肝、脾、肾、胸腺、延脑、大脑、小脑、舌头、食道和血液，均为阳性；④三种途径免疫的鸭，于12h至第21天均检测出DPV DNA。DPV强毒SC1株人工感染成年鸭2h后，即能从脑、肝、脾、法氏囊和胸腺中检出DPV DNA。12h后和死亡鸭的心、肝、脾、肺、肾、十二指肠、直肠、法氏囊、胸腺、胰腺、脑、胸肌、食道、腺胃、血液、舌头、皮肤、骨髓等组织器官和口腔分泌物及粪便中，均检测到DPV的DNA。该研究为阐明鸭瘟病毒在体内分布提供了重要的数据。