抗人整合素αvβ3-组织因子融合蛋白基因的构建和表达 |
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作者姓名: | 刘大斌 张昕 安小平 张宝中 王盛 周育森 童贻刚 |
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作者单位: | 军事医学科学院,微生物流行病研究所,病原微生物生物安全国家重点实验室,北京,100071 |
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基金项目: | 全军"十一五"计划 |
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摘 要: | 目的:利用基因工程技术构建和表达抗人整合素αvβ3单链抗体(scFv)与人可溶性组织因子(sTF)的融合蛋白scFv-sTF。方法:用重叠延伸PCR技术扩增scFv基因,同时用组装PCR方法人工合成sTF基因,然后以酶切连接方式融合2个基因,并克隆至原核表达载体pQE80L中,构建表达质粒pQE80L-scFv-sTF,以重组子转化大肠杆菌M15诱导目的基因表达。结果:SDS-PAGE分析显示工程菌可以表达相对分子质量约55×103的融合蛋白scFv-sTF,Western印迹分析证实表达的目的蛋白具有6×His标签;经低剂量IPTG诱导和较低温度培养,scFv-sTF获得了可溶性表达;纯化回收目的蛋白,ELISA试验证实,该重组抗体分子具有良好的抗原结合活性。结论:构建并表达了抗人整合素αvβ3的单链抗体融合蛋白scFv-sTF,并验证了其抗原结合活性,初步证明它可以与抗原特异性结合,为进一步研究其抗肿瘤作用打下了基础。
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关 键 词: | 整合素αvβ3 单链抗体 组织因子 融合蛋白 |
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