| 复合探针荧光定量PCR方法的建立 |
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| 引用本文： | 陈苏红,王小红,张敏丽,王升启.复合探针荧光定量PCR方法的建立[J].生物技术通讯,2003,14(2):127-130. |
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| 作者姓名： | 陈苏红 王小红 张敏丽 王升启 |
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| 作者单位： | 军事医学科学院,放射医学研究所,北京,100850 |
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| 摘 要： | 为了对特定基因进行实时检测，根据荧光能量转移(FRET)原理，设计及合成了一种新的FRET复合探针，该探针由一条长的荧光杂交探针和短的淬灭探针构成，其中荧光探针5′端接一荧光素分子，3′端接一延伸阻断分子磷酸，淬灭探针3′端连接一个淬灭分子对甲基红，淬灭探针与荧光探针5′端互补，无模板时，该探针杂交形成复合探针。无荧光产生，当有模板时，荧光探针与模板杂交，荧光不能被淬灭，产生的荧光与模板量成正比。根据复合探针的反应原理，研究了该探针的FRET性质及影响因素包括淬灭探针及扩增片段长度、荧光探针与淬灭探针的合适比例及镁离子浓度。实验结果显示淬灭探针及扩增片段长度对复合探针的作用有明显的影响，本实验采用淬灭探针长21个核苷酸，扩增片段长127bp，荧光探针与淬灭探针的合适比例为1：1，镁离子浓度为3mmo1／L，可获得最佳的反应体系；该复合探针合成简单，淬灭彻底，具有良好的准确性与特异性，敏感性达10^2拷贝，并具有较宽的动力学定量范围，可对10^2—10^9拷贝范围内的待检样品进行准确的定量。复合探针技术可应用于病毒感染水平、转基因拷贝数及单核苷酸多态性等检测。
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| 关 键 词： | 复合探针 荧光定量PCR 荧光能量转移 FRET 特定基因 实时检测 |
| 文章编号： | 1009-0002(2003)02-0127-04 |
| 修稿时间： | 2002年11月4日 |
Fluorescent quantitative PCR with complex probe technique |
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| CHEN Su-hong,WANG Xiao-hong,ZHANG Min-li,WANG Sheng-qi.Fluorescent quantitative PCR with complex probe technique[J].Letters in Biotechnology,2003,14(2):127-130. |
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| Authors: | CHEN Su-hong WANG Xiao-hong ZHANG Min-li WANG Sheng-qi |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | complex probe fluorescent quantitative PCR fluorescence resonance energy transfer |
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