SMB-S15细胞中朊病毒PMCA方法的建立及对白藜芦醇抗朊病毒作用的评价 |
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作者姓名: | 周冬花 王晶 肖康 武月章 石琦 董小平 |
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作者单位: | 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所,传染病预防控制国家重点实验室,北京102206;中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所,传染病预防控制国家重点实验室,北京102206;中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所,传染病预防控制国家重点实验室,北京102206;中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所,传染病预防控制国家重点实验室,北京102206;中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所,传染病预防控制国家重点实验室,北京102206;中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所,传染病预防控制国家重点实验室,北京102206 |
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基金项目: | 国家自然科学基金;国家自然科学基金;国家自然科学基金 |
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摘 要: | 朊病毒是一类能引起人或动物神经退行性疾病的感染因子。蛋白质错误折叠循环扩增(Protein misfolding cy-clic amplification,PMCA)是一种常见的朊病毒体外扩增技术。白藜芦醇是一种具有较高研究价值的植物抗菌素。为了建立SMB-S15细胞中朊病毒的PMCA体系,并探索PMCA技术在评价白藜芦醇抗朊病毒作用的意义,本研究以朊病毒感染细胞系SMB-S15细胞匀浆为种子,健康小鼠脑组织匀浆为底物,建立PMCA技术平台。将不同浓度的白藜芦醇导入PMCA体系,通过Western Blot方法检测PMCA产物中异常朊蛋白(PrPSc)的生成和变化。结果显示:SMB-S15细胞中PrPSc可以在建立的PMCA体系有效地复制。新生成的PrPSc分子的糖基化特征与原始细胞中的PrPSc不同,其双糖基化分子比例明显增加。同时也有别于羊瘙痒因子139A和ME7感染小鼠脑组织中的PrPSc分子。加入白藜芦醇后,PrPSc在PMCA体系中的复制明显被抑制,呈现出剂量依赖效应,其EC50约为4.616μM。这些结果表明:SMB-S15细胞中的PrPSc可以通过PMCA大量扩增,建立的PMCA技术可有效地反映白藜芦醇对PrPSc在体外复制的抑制作用。
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关 键 词: | 朊病毒病 朊病毒 SMB-S15细胞 蛋白质错误折叠循环扩增(PMCA) 异常朊蛋白(PrPSc) 白藜芦醇 |
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