胱天蛋白酶募集域蛋白9的可溶性表达及纯化 |
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引用本文: | 彭敏,张晨,王珏,陈浩,孔庆涛,桑红.胱天蛋白酶募集域蛋白9的可溶性表达及纯化[J].中国真菌学杂志,2023(2):140-145. |
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作者姓名: | 彭敏 张晨 王珏 陈浩 孔庆涛 桑红 |
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作者单位: | 1. 南京大学医学院附属金陵医院皮肤科;2. 南京大学化学化工学院 |
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摘 要: | 目的 制备可溶性TrxA-CARD9蛋白及其临床突变型。方法 将构建好的原核系统表达质粒转化至大肠杆菌感受态细胞后,通过不同诱导条件筛选合适的表达条件。使用精氨酸辅助目的蛋白进行非变性溶解,并通过聚乙烯亚胺和硫酸铵沉淀法去除核酸和杂蛋白,最终利用阴离子交换和肝素亲和色谱柱纯化融合蛋白。结果 成功构建表达质粒并纯化融合蛋白,酶切去除TrxA标签后通过质谱鉴定其为可溶性CARD9蛋白。结论 成功实现了全长CARD9序列在原核系统中的高可溶性表达,为研究CARD9蛋白生物结构和功能提供了基础,并为寻找治疗真菌感染的潜在靶点和治疗方法提供新思路。
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关 键 词: | 胱天蛋白酶募集域蛋白 精氨酸 Trx-A标签 蛋白表达 可溶性蛋白 |
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