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| 地高辛标记的Northern blot检测鼠疫菌sRNA | |
| 引用本文： | 邓仲良,苏山春,孟祥荣,吴移谋,杨瑞馥,韩延平.地高辛标记的Northern blot检测鼠疫菌sRNA[J].微生物学报,2013,53(3):293-298. |
| 作者姓名： | 邓仲良 苏山春 孟祥荣 吴移谋 杨瑞馥 韩延平 |
| 作者单位： | 1. 湖南省南华大学公共卫生学院,衡阳421001;军事医学科学院微生物与流行病研究所,北京 100071 2. 军事医学科学院微生物与流行病研究所,北京,100071 3. 湖南省南华大学公共卫生学院,衡阳,421001 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金(31171248，30930001) |
| 摘 要： | 目的]随着高通量测序方法的应用,越来越多的sRNA (small non-coding RNA,sRNA)需验证.本研究建立用地高辛标记Northern blot检测鼠疫菌sRNA的技术,为细菌sRNA验证提供一种灵敏、特异的方法.方法]在低铁条件下,提取鼠疫菌总RNA,10％ dPAGE分离后电转到尼龙膜上并用紫外线交联RNA.膜经地高辛标记RyhB1或RyhB2寡核苷酸RNA探针过夜杂交后洗脱、封闭和免疫检测,最后曝光显影.结果]地高辛标记的Northern blot曝光时间为20 s-3 min,RyhB1或RyhB2检测灵敏度分别为0.005 μg和0.05 μg.RyhB1或RyhB2探针特异性好,相互间无交叉反应.带正电或中性的尼龙膜都适用于杂交反应.RNA探针在42℃-65℃内杂交均可,提高温度可减少非特异性反应；而DNA探针杂交温度需摸索.结论]本研究成功构建一种地高辛标记Northern blot检测鼠疫菌sRNA技术,具有特异性好、灵敏度高、探针易保存、曝光时间短等优点,为细菌sRNA验证和功能研究提供有利工具. |
| 关 键 词： | sRNA RNA寡核苷酸探针 地高辛 Northern blot |
| 收稿时间： | 2012/11/14 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2012/12/18 0:00:00 |
Detection of Yersinia pestis sRNA by digoxigenin-labeled Northern blot |
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| Zhongliang Deng,Shanchun Su,Xiangrong Meng,Yimou Wu,Ruifu Yang and Yanping Han.Detection of Yersinia pestis sRNA by digoxigenin-labeled Northern blot[J].Acta Microbiologica Sinica,2013,53(3):293-298. | |
| Authors: | Zhongliang Deng Shanchun Su Xiangrong Meng Yimou Wu Ruifu Yang and Yanping Han |
| Abstract: | |
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