| AphA蛋白促进副溶血弧菌c-di-GMP合成和生物膜形成 |
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| 引用本文： | 黄倩,张义全,胡小许,王丽,杨瑞馥,钟青萍,周冬生,黎晓敏.AphA蛋白促进副溶血弧菌c-di-GMP合成和生物膜形成[J].微生物学报,2014,54(5):525-531. |
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| 作者姓名： | 黄倩 张义全 胡小许 王丽 杨瑞馥 钟青萍 周冬生 黎晓敏 |
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| 作者单位： | 西南大学动物科技学院，重庆400715;军事医学科学院微生物流行病研究所，病原微生物生物安全国家重点实验室，北京100071;军事医学科学院微生物流行病研究所，病原微生物生物安全国家重点实验室，北京100071;军事医学科学院微生物流行病研究所，病原微生物生物安全国家重点实验室，北京100071;军事医学科学院微生物流行病研究所，病原微生物生物安全国家重点实验室，北京100071;华南农业大学食品学院，广东广州510642;军事医学科学院微生物流行病研究所，病原微生物生物安全国家重点实验室，北京100071;西南大学动物科技学院，重庆400715 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(31170127) |
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| 摘 要： | 【目的】综合运用表型和分子生化实验研究AphA蛋白对副溶血弧菌生物膜形成的调节机制。【方法】利用菌落褶皱和结晶紫染色实验比较aphA突变株(ΔaphA)和野生株(WT)的表型差异;进而利用色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)的方法分别检测ΔaphA和WT中c-di-GMP分子含量;提取ΔaphA和WT的总RNA,采用实时定量RT-PCR的方法研究AphA对scrABC和scrG的调控关系;分别构建克隆有scrABC和scrG上游启动子区的LacZ重组质粒,并将重组质粒转入ΔaphA和WT中,通过测定并比较两株菌中β-半乳糖苷酶活性差异来进一步研究AphA对scrABC和scrG的调控关系;PCR扩增scrABC和scrG的整个启动子区DNA序列,并纯化His-AphA蛋白,通过凝胶阻滞实验(EMSA)验证AphA对靶基因启动子区是否具有直接的相互作用。【结果】表型结果显示AphA能促进c-di-GMP的合成和生物膜形成;实时定量RT-PCR和LacZ结果表明AphA能抑制scrABC和scrG的转录表达;EMSA结果证明AphA不能结合到scrABC和scrG的启动子区DNA上。【结论】AphA间接抑制scrABC和scrG的表达是其促进副溶血弧菌c-di-GMP合成及生物膜形成的机制之一。
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| 关 键 词： | 副溶血弧菌 生物膜形成 c-di-GMP AphA scrABC scrG |
| 收稿时间： | 2013/9/13 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2013/12/24 0:00:00 |
AphA is an activator of c-di-GMP synthesis and biofilm formation in Vibrio parahaemolyticus |
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| Qian Huang,Yiquan Zhang,Xiaoxu Hu,Li Wang,Ruifu Yang,Qingping Zhong,Dongsheng Zhou and Xiaomin Li.AphA is an activator of c-di-GMP synthesis and biofilm formation in Vibrio parahaemolyticus[J].Acta Microbiologica Sinica,2014,54(5):525-531. |
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| Authors: | Qian Huang Yiquan Zhang Xiaoxu Hu Li Wang Ruifu Yang Qingping Zhong Dongsheng Zhou and Xiaomin Li |
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