| 蛋白激酶C抑制剂Staurosporine对A类清道夫受体胞浆域结构去除后功能的影响 |
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| 引用本文： | 管晓翔,陈琪,范乐明.蛋白激酶C抑制剂Staurosporine对A类清道夫受体胞浆域结构去除后功能的影响[J].生物化学与生物物理进展,2004,31(8):693-698. |
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| 作者姓名： | 管晓翔 陈琪 范乐明 |
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| 作者单位： | 1. 南京医科大学动脉硬化研究中心,南京,210029;南京军区南京总医院肿瘤科,南京,210002
2. 南京医科大学动脉硬化研究中心,南京,210029 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展规划项目（973）(TG200056910)和江苏省科委应用基础资助项目（BK2001113）. |
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| 摘 要： | A类清道夫受体（scavenger receptor，SR-A）是一种主要位于巨噬细胞膜表面的同源三聚体糖蛋白，能够结合和摄取多种配基并介导内移.在清道夫受体胞浆域有几个潜在的磷酸化位点，有关这些磷酸化位点与受体功能之间的确切关系目前尚所知甚少.为深入探讨A类清道夫受体胞浆域与磷酸化之间的关系,以及受体胞浆域磷酸化对受体功能的影响，实验以含有SR-A cDNA质粒为模板,采用PCR方法扩增不含胞浆域序列的清道夫受体，同时扩增全长清道夫受体作为对照.PCR产物经纯化酶切后，进一步亚克隆到PcDNA3.1/HisB中，测序结果表明,重组产物能够编码正确的氨基酸序列.重组产物经脂质体Lipofectamine(LF2000)介导转化入CHO细胞中，在含G418选择性培养液中培养筛选14天后，分离阳性克隆, 继续培养.采用流式细胞计数仪（FACS）鉴定转化筛选后细胞能否表达具有功能的清道夫受体.结果发现,转化的CHO细胞可以稳定表达SR-A的蛋白质，但受体胞浆域去除后,摄取配基的能力明显弱于全长组（1∶1.337）.用荧光DiI标记乙酰化低密度脂蛋白(DiI-AcLDL),37℃孵育转化细胞5 h后,激光共聚焦显微镜下观察到：全长受体转化组细胞荧光散在分布于细胞膜和细胞器，而去除胞浆域组荧光只局限于细胞膜，说明SR-A胞浆域可能起着介导受体内移的作用.进一步比较蛋白激酶C抑制剂星形孢菌素(staurosporine，STA）对两组细胞受体功能的影响，发现经STA处理后，全长组受体与配基的结合及摄取明显增高，而胞浆域去除后受体不受STA的调控.从而证明磷酸化药物可能是通过改变SR-A胞浆域磷酸化水平而发挥作用，受体胞浆域磷酸化可能决定着受体的内移，并参与调节受体的活性.
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| 关 键 词： | A类清道夫受体，胞浆域，磷酸化，蛋白激酶C抑制剂 |
| 收稿时间： | 2004/2/23 0:00:00 |
| 修稿时间： | 4/7/2004 12:00:00 AM |
The Role of Staurosporine in Mediating The Function of Cytoplasmic Domain-truncated Scavenger Receptor |
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| GUAN Xiao-Xiang,Chen Qi and Fan Le-Ming.The Role of Staurosporine in Mediating The Function of Cytoplasmic Domain-truncated Scavenger Receptor[J].Progress In Biochemistry and Biophysics,2004,31(8):693-698. |
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| Authors: | GUAN Xiao-Xiang Chen Qi and Fan Le-Ming |
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| Institution: | Atherosclerosis Research Center, Nanjing Medical University, Nanjing 210029, China;Department of Oncology, General Hospital of Nanjing Military Command, Nanjing 210002, China;Atherosclerosis Research Center, Nanjing Medical University, Nanjing 210029, China;Atherosclerosis Research Center, Nanjing Medical University, Nanjing 210029, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | scavenger receptor cytoplasmic domain phosphorylation protein kinase C inhibitor |
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