人纤溶酶原K1-3基因的克隆、表达和产物的纯化及抗癌活性分析 |
| |
引用本文: | 张添元,罗进贤,陆幸妍.人纤溶酶原K1-3基因的克隆、表达和产物的纯化及抗癌活性分析[J].生物工程学报,2002,18(5). |
| |
作者姓名: | 张添元 罗进贤 陆幸妍 |
| |
作者单位: | 中山大学基因工程教育部重点实验室,生物化学系,广州 510275 |
| |
基金项目: | 广东省广州市"225"科技工程项目 |
| |
摘 要: | 纤溶酶原K13功能区是近年发现的血管生成抑制因子,具有抑制肿瘤生长和转移的活性。以人血管生成抑制素cDNA为模板用PCR技术扩增了K13功能区的基因,DNA序列分析后克隆至质粒pPIC9K上获得重组质粒pPIC9K13,转化毕节酵母GS115,用PCR和G418法筛选高拷贝转化子,进行摇瓶发酵。SDSPAGE和Western blot分析结果证实K13基因已在GS115分泌表达,并具有免疫活性。选用30L和80L罐进行高密度发酵,甲醇诱导48h细胞密度达到OD250~300,比摇瓶提高5~6倍,表达量150200mg/L。发酵上清液经Streamline SP离子交换及PhenylSephorose疏水层析纯化,在SDSPAGE上显示一条带,纯度96%,动物实验证明纯化产物具有抗血管生成和抗肿瘤的活性。
|
关 键 词: | 人纤溶酶原K1-3, 基因克隆和表达, 纯化, 抗癌活性 |
Cloning and Expression of Kringle 1-3 Gene of Human Plasminogen and the Purification and Bioactivity of Its Expressed Product |
| |
Abstract: | |
| |
Keywords: | |
本文献已被 万方数据 等数据库收录! |
| 点击此处可从《生物工程学报》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《生物工程学报》下载免费的PDF全文 |