利用突变的绿色荧光蛋白基因为标记构建新型克隆载体

将三位点替换突变的绿色荧光蛋白（ＧＦＰ＿Ｓ６５Ｔ、Ｖ６８Ｌ、Ｓ７２Ａ）基因插入到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ（＋）的ＸｂａⅠ和ＳａｃⅠ之间，构建为新型的克隆载体ｐＧｒｅｅｎＬＤ。此质粒载体在Ｅ．ｃｏｌｉ中表达后使菌落在日光下呈现黄绿色，而在长波紫外光照射下呈现亮绿荧光，当外源ＤＮＡ片段插入该载体的多克隆位点使ｇｆｐ基因表达受阻时，转化的Ｅ．ｃｏｌｉ菌落为白色。因此可以用Ｅ．ｃｏｌｉ菌落黄绿色／绿色荧光的消失作为检测指标来筛选含有重组质粒的克隆。