| 利用不同碳源进行毕赤酵母高密度发酵及TEF-1启动子指导下的HPV16_L1蛋白表达 |
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| 引用本文： | 夏烨,黄惟巍,杨旭,孙鹏艳,姚月婷,王世杰,刘存宝,孙文佳,白红妹,姚宇峰,马雁冰. 利用不同碳源进行毕赤酵母高密度发酵及TEF-1启动子指导下的HPV16_L1蛋白表达[J]. 中国生物工程杂志, 2015, 35(10): 39-43. DOI: 10.13523/j.cb.20151006 |
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| 作者姓名： | 夏烨 黄惟巍 杨旭 孙鹏艳 姚月婷 王世杰 刘存宝 孙文佳 白红妹 姚宇峰 马雁冰 |
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| 作者单位： | 1. 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所 昆明 650118;2. 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室 昆明 650118;3. 云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心 昆明 650118 |
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| 基金项目： | 云南省应用基础研究面上研究项目(2013FZ137,2010ZC232)、中央高校基本科研业务费(2012N08)资助项目 |
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| 摘 要： | 目的:研究不同碳源对于毕赤酵母菌株在发酵罐中高密度生长,以及对组成型翻译延伸因子-1(TEF-1)启动子指导下HPV16_L1蛋白表达的影响。方法:利用1.5L发酵罐使用不同碳源进行毕赤酵母的高密度发酵,检测在不同碳源利用情况下菌体的增殖动力学,并以Western blot动态分析HPV16_L1蛋白的表达水平。结果:以甘油作为碳源,菌体细胞湿重可达到510g/L(OD600为189.4),HPV16_L1的表达在72h之前保持高水平;在甲醇和葡萄糖中菌体细胞湿重都可达到220g/L左右(OD600分别为75.3和77.3),甲醇利用下HPV L1蛋白在144h后仍保持较高水平表达,葡萄糖中60h HPV L1表达开始显著下降;在山梨醇作为碳源情况下菌体未能在发酵罐中获得高密度生长;总体上,甘油作为碳源在72h左右可获得最高的目的蛋白收获总量。结论:为实现毕赤酵母高密度生长与异源基因在TEF-1启动子指导下高效表达,以及HPV L1蛋白的简易、有效制备提供了基础。
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| 关 键 词： | TEF-1启动子 毕赤酵母 HPV L1蛋白 碳源 高密度发酵 |
| 收稿时间： | 2015-06-15 |
The Effects of Carbon Source on High-density Fermentation of Pichia pastoris and HPV16_L1 Expression under the Control of Constitutive TEF-1 Promoter |
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| XIA Ye,HUANG Wei-wei,YANG Xu,SUN Peng-yan,YAO Yue-ting,WANG Shi-jie,LIU Cun-bao,SUN Wen-jia,BAI Hong-mei,YAO Yu-feng,MA Yan-bing. The Effects of Carbon Source on High-density Fermentation of Pichia pastoris and HPV16_L1 Expression under the Control of Constitutive TEF-1 Promoter[J]. China Biotechnology, 2015, 35(10): 39-43. DOI: 10.13523/j.cb.20151006 |
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| Authors: | XIA Ye HUANG Wei-wei YANG Xu SUN Peng-yan YAO Yue-ting WANG Shi-jie LIU Cun-bao SUN Wen-jia BAI Hong-mei YAO Yu-feng MA Yan-bing |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Pichia pastoris High-density fermentation TEF-1 promoter Human papilloma virus major protein L1 Carbon source |
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