| 同源重组法制备口蹄疫病毒多基因重组腺病毒 |
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| 引用本文： | 卢曾军,曹轶梅,包惠芳,刘在新,赵启祖,陈应理,常惠芸,谢庆阁.同源重组法制备口蹄疫病毒多基因重组腺病毒[J].中国病毒学,2004,19(2):125-128. |
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| 作者姓名： | 卢曾军 曹轶梅 包惠芳 刘在新 赵启祖 陈应理 常惠芸 谢庆阁 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院兰州兽医研究所畜禽病毒学重点实验室,甘肃兰州,730046 |
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| 基金项目： | 国家重大基础研究发展规划(973)项目(G1999011903) |
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| 摘 要： | 通过细菌内同源重组的方法成功构建了含有O型口蹄疫病毒P1-2A和3C蛋白酶基因和3D基因的重组腺病毒表达载体.首先将P1-2A、3C和3D基因亚克隆连接到穿梭质粒pShuttle-CMV上,再将重组穿梭质粒用PmeI线性化后电转化携带有腺病毒骨架载体pAdeasy-1的大肠杆菌BJ5183感受态菌,经细菌内同源重组产生pAdcmv-p12x3c和pAdcmv-p12x3cd重组腺病毒质粒,经序列测定证实目的基因已正确的插入到腺病毒骨架载体中.重组腺病毒质粒经PacI线性化后转染HEK293细胞,转染1w内细胞出现典型病变.取转染细胞裂解液上清连续传代至第4代时,细胞于24~48h内即病变完全,收取接毒后24h细胞进行PCR和RT-PCR检测,表明目的基因已整合到腺病毒基因组内,且在mRNA水平上有表达.取第4、6、8和10代病毒,用蛋白酶K处理后可扩增出目的基因,证明此重组病毒可稳定存在.本研究为FMDV腺病毒活载体疫苗的研究奠定了基础.
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| 关 键 词： | 口蹄疫病毒 重组腺病毒 同源重组 |
| 文章编号： | 1003-5152(2004)02-0125-04 |
| 修稿时间： | 2003年8月29日 |
Construction of Recombinant Adenovirus Vector Containing the Capsid, 3C protease and 3D Polymerase Coding Regions of FMDV by Homologous Recombination |
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| LU Zeng-jun,CHAO Yi-mei,BAO Hui-fang,LIU Zai-xin,ZHAO Qi-zu,CHEN Ying-li,CHANG Hui-yun,XIE Qin-ge.Construction of Recombinant Adenovirus Vector Containing the Capsid, 3C protease and 3D Polymerase Coding Regions of FMDV by Homologous Recombination[J].Virologica Sinica,2004,19(2):125-128. |
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| Authors: | LU Zeng-jun CHAO Yi-mei BAO Hui-fang LIU Zai-xin ZHAO Qi-zu CHEN Ying-li CHANG Hui-yun XIE Qin-ge |
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| Institution: | 1.Lanzhou Veterinary Research Institute, CAAS,Lanzhou, Gansu, 730046, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Foot-and-mouth disease virus (FMDV) Recombinant adenovirus Homologous recombination |
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