| 利用pSOS系统筛选靶向HBV病毒X基因的siRNA |
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| 引用本文： | 韦德芳,高健,曾春华,彭明利,任红. 利用pSOS系统筛选靶向HBV病毒X基因的siRNA[J]. 生物技术通报, 2010, 0(11) |
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| 作者姓名： | 韦德芳 高健 曾春华 彭明利 任红 |
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| 作者单位： | 1. 重庆医科大学附属第二医院消化科,重庆,400010
2. 重庆医科大学病毒性肝炎研究所感染性疾病分子生物学教育部重点实验室,重庆,400010 |
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| 摘 要： | 构建靶向乙肝病毒(HBV)X基因的真核表达载体pSOS-X-siRNA和pSOS-siRNA,转染肝癌细胞系HepG2和HepG2.2.15,筛选和验证高效siRNA。设计4个靶向X基因siRNA,将siRNA和HBx基因插入载体pSOS得重组质粒pSOS-X-siRNA;pSOS-X-siRNA经PacI酶切去除目的片段HBx后得pSOS-siRNA。将质粒pSOS-X-siRNA和pSOS-siRNA分别转HepG2和HepG2.2.15肝癌细胞株。荧光显微镜下观察HepG2细胞绿色荧光(GFP)减弱程度预估干扰效率。ELISA检测HepG2.2.15细胞上清HBsAg、HBeAg表达,Western blotting检测胞内蛋白HBsAg、HBcAg表达,Real time PCR检测胞内HBsmRNA、HBx mRNA的转录。转染4d后,siRNA4使HepG2细胞的GFP信号表达程度最低,为阴性对照的9%,预测其干扰效果最强。siRNA4使HepG2.2.15细胞转染后4d上清的HBsAg蛋白表达为对照的(13.92±1.14)%(P0.05)、HBeAg为(21.69±4.92)%(P0.05),胞内的HBsAg、HBcAg蛋白表达量灰度比值为0.175±0.025、0.0825±0.028,均为各处理组中最低(P0.01),HBs mRNA和HBx mRNA分别降为对照的0.237±0.028(P0.01)、0.110±0.022(P0.01),差异有统计学意义,证实siRNA4为高效干扰位点。利用pSOS成功筛选并验证构建靶向HBV X基因的siRNA靶点。
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| 关 键 词： | 乙肝病毒 X基因 RNA干扰 |
Selection and Validation of Optimal siRNA Target Sites for Hepatitis B Virus X Gene mRNA by pSOS Vector System |
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| Wei Defang,Gao Jian,Zeng Chunhua,Peng Mingli,Ren Hong. Selection and Validation of Optimal siRNA Target Sites for Hepatitis B Virus X Gene mRNA by pSOS Vector System[J]. Biotechnology Bulletin, 2010, 0(11) |
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| Authors: | Wei Defang Gao Jian Zeng Chunhua Peng Mingli Ren Hong |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | pSOS |
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