| 人源酪蛋白激酶Ⅱ催化亚基的构建及表达纯化 |
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| 引用本文： | 柏 学,李彩虹,佟红娜,胡克平,高 海. 人源酪蛋白激酶Ⅱ催化亚基的构建及表达纯化[J]. 现代生物医学进展, 2020, 0(7): 1201-1205 |
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| 作者姓名： | 柏 学 李彩虹 佟红娜 胡克平 高 海 |
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| 作者单位： | 中国医学科学院 北京协和医学院 药用植物研究所 北京 100193;复旦大学生物医学研究所 上海 200032 |
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| 基金项目： | 中国医学科学院医学与健康科技创新工程项目（CIFMS 2016-12M-1-002） |
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| 摘 要： | 目的:构建人源CK2催化亚基pET-28a(+)-hcsnk2a1和pET-28a(+)-hcsnk2a2重组质粒,并进行原核表达纯化得到高纯度融合蛋白,为进一步开展CK2生理病理机制研究以及CK2作为肿瘤抑制靶点相关抑制剂的筛选和评价提供实验基础。方法:利用合成的人源csnk2a1和csnk2a2目的基因片段,将酶切连接得到的重组质粒经测序验证后,进行大肠杆菌感受态BL21 (DE3)/Transetta (DE3)转化。使用合适浓度IPTG诱导融合蛋白的表达以得到可溶性的融合蛋白,并应用AKTA avant蛋白纯化仪和Ni2+-NTA预装柱进行纯化,蛋白纯度最后经SDS-PAGE胶分离后考马斯亮蓝染色和Western Blot检测鉴定。结果:测序结果表明pET-28a(+)-hcsnk2a1和pET-28a(+)-hcsnk2a2质粒均成功被构建;经转化诱导表达后,成功纯化得到相对分子量为42KD的his-hcsnk2a1和38KD的his-hcsnk2a2目的融合蛋白。结论:首次成功构建得到pET-28a(+)-hcsnk2a1和pET-28a(+)-hcsnk2a2质粒;并表达纯化得到高浓度和高纯度的his-hcsnk2a1和his-hcsnk2a2融合蛋白,为后期的蛋白功能研究和抑制剂筛选评价提供了基础。
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| 关 键 词： | 原核表达；蛋白纯化；酪蛋白激酶Ⅱ；csnk2a1；csnk2a2 |
| 收稿时间： | 2019-10-22 |
| 修稿时间： | 2019-11-16 |
Construction, Expression and Purification of Human Casein Kinase II Catalytic Subunit |
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| BAI Xue,LI Cai-hong,TONG Hong-n,HU Ke-ping,GAO Hai. Construction, Expression and Purification of Human Casein Kinase II Catalytic Subunit[J]. Progress in Modern Biomedicine, 2020, 0(7): 1201-1205 |
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| Authors: | BAI Xue LI Cai-hong TONG Hong-n HU Ke-ping GAO Hai |
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| Affiliation: | Institute of Medicinal Plant Development, Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College, Beijing, 100193, China; Institutes of Biomedical Sciences, Fudan University, Shanghai, 200032, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Prokaryotic expression Protein purification Casein kinase 2 Csnk2a1 Csnk2a2 |
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