ASFV多表位融合基因MeP72基因的克隆、表达及其间接ELISA检测方法建立

[目的]建立以重组多表位融合蛋白re MeP72为包被抗原的ASFV间接ELISA检测方法。[方法]预测分析ASFV结构蛋白P72的优势抗原表位,串连优势抗原表位并优化稀有密码子以合成多表位融合抗原基因MeP72。在毕赤酵母表达系统中诱导表达,分析重组融合蛋白的反应原性。用re MeP72做包被抗原,建立ASFV的ELISA间接检测方法。[结果]成功构建了402 bp的MeP72基因片段。SDS-PAGE和Western Blotting分析该蛋白在14 k Da有条带,证明其反应原性良好。经ELISA反应条件优化,建立的ELISA方法与猪的其他病原的阳性血清不发生交叉反应,且可检测到稀释倍数为1∶512 ASFV阳性血清,证明其特异性和敏感性良好。[结论]建立了抗原包被浓度为15μg/mL,一抗、二抗稀释倍数分别为1∶200、1∶5 000倍的特异性和敏感性良好的re MeP72-ELISA检测方法。