PDE2A通过影响脉络膜血管生成和NADPH氧化酶/ROS/NF-κB通路参与年龄相关性黄斑变性

摘要 目的：探究磷酸二酯酶2A（Phosphodiesterase 2A，PDE2A）在年龄相关性黄斑变性（Age-related macular degeneration，AMD）中的可能作用及其对脉络膜新生血管（Choroidal neovascularization，CNV）形成的影响。方法：通过qRT-PCR法检测36例湿性AMD患者（AMD组）和36例健康体检者（Healthy组）的血清PDE2A水平。将恒河猴脉络膜血管内皮细胞系（RF/6A）分为Normoxia组、Hypoxia组、Hypoxia+NC组、Hypoxia+PDE2A组。使用Lipofectamine2000分别将NC-shRNA和PDE2A-shRNA慢病毒转染入Hypoxia+NC组和Hypoxia+PDE2A组，转染后，根据分组情况，在RPMI 1640培养基中添加200 mM CoCl₂来对RF/6A细胞进行低氧处理。建立了激光诱导的CNV小鼠模型后，将36只建模成功的小鼠随机分为Model组、NC-shRNA组和PDE2A-shRNA组，每组12只。选取12只未建模的小鼠作为Control组。分别对NC-shRNA组和PDE2A-shRNA组小鼠玻璃体腔注射相应慢病毒，共治疗7 d。然后对小鼠进行眼底荧光血管造影（fundus fluorescein angiography，FFA）检查和眼球HE染色。使用相应试剂盒检测小鼠脉络膜组织中ROS、SOD、MDA的含量。通过qRT-PCR或Western blot检测RF/6A细胞或脉络膜组织中PDE2A、VEGFA、VEGFR2、HIF-1α、NOX2、NOX4和NF-κB p65的表达。结果：与Healthy组相比，AMD组患者的血清PDE2A水平显著升高（1.00±0.23 vs 3.09±1.46， P<0.001）。与Hypoxia组相比，Hypoxia+PDE2A组RF/6A细胞的闭合管腔数量减少（P<0.05），PDE2A、VEGFA、VEGFR2和HIF-1?琢的mRNA和蛋白表达水平均降低（P<0.05）。与Model组相比，PDE2A-shRNA组CNV小鼠脉络膜病变明显减轻，血管生成和脉络膜增明显减少，CNV相对荧光强度降低（P<0.05），脉络膜组织中的PDE2A、VEGFA、VEGFR2和HIF-1α的mRNA和蛋白表达水平均降低（P<0.05）。与Model组相比，PDE2A-shRNA组小鼠脉络膜组织中的ROS和MDA含量均降低，SOD含量升高（P<0.05）。与Model组相比，PDE2A-shRNA组小鼠脉络膜组织中的NOX2、NOX4和细胞核NF-κB p65蛋白相对表达量均降低（P<0.05）。结论：PDE2A通过影响脉络膜血管生成和NADPH氧化酶/ROS/NF-κB通路参与年龄相关性黄斑变性。