Sp1基因RNA干扰载体的构建及鉴定 |
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作者姓名: | 曲璇 陈苏宁 吴琳 申亮亮 林伟 赵华栋 刘新平 张健 |
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作者单位: | [1]第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室,国家肿瘤生物学重点实验室,陕西西安710032 [2]第四军医大学西京医院药剂科,陕西西安710032 |
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摘 要: | 目的:构建干扰载体pSilencer3.1-Sp1,并初步研究其对Sp1基因的干扰作用。方法:根据Sp1cDNA编码序列,设计并合成针对Sp1基因的特异性RNA干扰片段,并将其克隆入pSilencer3.1-H1neo干扰载体中,构建Sp1基因小干扰RNA(siRNA)真核表达载体pSilencer3.1-Sp1;分别将阴性对照载体pSilencer3.1与重组载体pSilencer3.1-Sp1经脂质体LipofectAMINE2000介导转染HeLa细胞,采用RT-PCR、Western blot方法分别检测Sp1基因的转录与表达水平。结果:构建了Sp1基因siRNA真核表达载体pSilencer3.1-Sp1,经酶切、测序鉴定证实克隆正确,并在mRNA水平和蛋白水平证实了载体的干扰效果。结论:特异性siRNA能明显抑制Sp1基因在HeLa细胞中的表达,为进一步研究Sp1的生物学功能和作用机制奠定了实验基础。
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关 键 词: | RNA干扰 Sp1基因 小干扰RNA |
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