| 淀粉结合域与α-淀粉酶的融合表达及其酶学性质 |
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| 作者姓名： | 杨键 金辉 王青艳 黄日波 |
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| 作者单位： | 广西大学,生命科学与技术学院,广西亚热带生物资源保护利用重点实验室,南宁,530005;广西科学院,国家非粮生物质能源研究工程中心,南宁,530007 |
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| 基金项目： | 国家科技支撑计划项目，国际科技合作项目 |
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| 摘 要： | 利用RT-PCR从Rhizopus oryzaeGX-08总RNA中克隆到糖化酶的淀粉结合域(SBD)基因(sbd),将该基因片段插入α-淀粉酶(CN7A)基因cn7a的5′端构建融合表达质粒pSE-sbdcn7a。嵌合酶SBD-CN7A在Escherichia coliJM109表达,并经Ni-NTA、Sephacryl S300纯化。酶学性质研究表明:嵌合酶在最适作用条件方面与原始酶并无明显差别;在以生玉米粉为底物时,其比酶活提高了8.7倍,而以可溶性淀粉为底物时其比酶活是原始酶的1.8倍,Km也从3.784 g/L降低为2.234 g/L;嵌合酶在65℃下的半衰期从10 min缩短为4 min。结果表明,淀粉结合域SBD的融合赋予了α-淀粉酶CN7A水解生淀粉的能力。
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| 关 键 词： | 嵌合酶 淀粉结合域 热稳定性 |
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