靶向Bcl-2克服非小细胞肺癌EGFR-TKIs获得性耐药

摘要 目的：探讨靶向抗凋亡蛋白Bcl-2克服非小细胞肺癌EGFR-TKIs耐药的作用及重定位Bcl-2靶向抑制剂用于克服耐药的可行性。方法：通过药物浓度梯度递增法构建非小细胞肺癌多代EGFR-TKIs耐药株，根据亲本细胞和多代EGFR-TKIs耐药的非小细胞肺癌细胞的RNA-seq数据筛选出潜在耐药相关基因Bcl-2，通过Western blot 检测其在耐药细胞中的蛋白水平。为了探讨Bcl-2诱导耐药的作用，采用siRNA干扰和使用Bcl-2的抑制剂ABT199抑制Bcl-2，通过CCK8法、IncuCyte实时监测和Western blot等方法检测其对亲本和耐药细胞的细胞活力、药物敏感性、增殖和凋亡的影响。随后使用奥希替尼分别处理亲本及耐药细胞，通过Western Blot检测NRF2受到药物作用后及在耐药细胞中的蛋白水平，并以临床公共数据库分析辅助验证。使用siRNA干扰或NRF2抑制剂ML385敲低或抑制NRF2功能，借助Western Blot和CCK8法检测其对Bcl-2表达水平及对EGFR-TKI敏感性的影响；通过加入NRF2的激动剂Ki696探究其对Bcl-2的诱导作用、对EGFR-TKI敏感性的影响及取消靶向Bcl-2逆转耐药的作用。结果：Bcl-2在EGFR-TKIs耐药细胞中上调；敲低或抑制Bcl-2后，可选择性抑制耐药细胞的生长和活力，并诱导凋亡，且能逆转包括第三代药物奥希替尼在内的多代EGFR-TKIs耐药；EGFR-TKI可在敏感细胞中诱导NRF2的上调，且耐药细胞中上调的Bcl-2受NRF2调控。结论：EGFR-TKIs耐药细胞通过上调抗凋亡分子Bcl-2获得耐药，该分子的上调受NRF2的调控，靶向Bcl-2则可以逆转耐药。

Targeting Bcl-2 Overcomes Acquired Resistance to Multiple Generations of EGFR-TKIs in Non-Small Cell Lung Cancer