新型苏云金芽孢杆菌(−)γ-内酰胺酶基因的克隆与表达 |
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引用本文: | 孙康,鲁明杰,于爽,迟乃玉.新型苏云金芽孢杆菌(−)γ-内酰胺酶基因的克隆与表达[J].微生物学通报,2020,47(7):2040-2049. |
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作者姓名: | 孙康 鲁明杰 于爽 迟乃玉 |
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作者单位: | 大连大学生命科学与技术学院 辽宁 大连 116622 |
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基金项目: | 国家重点研发计划(2018YFC0311100) |
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摘 要: | 【背景】γ-内酰胺是一种重要的医药中间体,其自身具备手性不利于药物合成,通过γ-内酰胺酶选择性拆分可实现光学纯γ-内酰胺的制备。【目的】挖掘来源苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)的γ-内酰胺酶基因,探索光学纯γ-内酰胺的制备工艺。【方法】通过"acetamidase/formamidase"关键词检索苏云金芽孢杆菌基因组,对检索出的两条序列进行异源表达,而后通过高效液相色谱法检测重组菌对γ-内酰胺的降解情况,确定克隆的基因是否为γ-内酰胺酶基因。利用构建的重组菌进行5L发酵、底物拆分、产物回收的生产应用尝试。【结果】构建的skA2重组菌株具有(-)γ-内酰胺酶活性,其在小规模制备生产中表现良好。【结论】A基因是一段未经报道的(-)γ-内酰胺酶基因,丰富了生产者的酶工具箱。构建的skA2菌株可以满足工业制备(+)γ-内酰胺的生产需求,为合成光学纯药物奠定坚实基础。
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关 键 词: | γ-内酰胺酶,γ-内酰胺,基因发掘,手性拆分 |
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