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| 零背景转座技术高效构建重组家蚕杆状病毒表达系统 | |
| 引用本文： | 姚伦广,张红玲,冯娟,张二辉,文祯中. 零背景转座技术高效构建重组家蚕杆状病毒表达系统[J]. 微生物学报, 2009, 49(6): 831-837 |
| 作者姓名： | 姚伦广 张红玲 冯娟 张二辉 文祯中 |
| 作者单位： | 1. 中英南阳洛桑昆虫生物学联合实验室,河南省伏牛山昆虫生物学重点实验室,南阳师范学院生物科学与技术学院,南阳,473061 2. 中英南阳洛桑昆虫生物学联合实验室,河南省伏牛山昆虫生物学重点实验室,南阳师范学院生物科学与技术学院,南阳,473061;河南师范大学生命科学学院,新乡,453007 3. 中英南阳洛桑昆虫生物学联合实验室,河南省伏牛山昆虫生物学重点实验室,南阳师范学院生物科学与技术学院,南阳,473061;河南农业大学生命科学学院,郑州,450002 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金（30700750）；南阳市重大科技攻关项目（2007sy001）；河南省教育厅科技攻关项目（2008A180020） |
| 摘 要： | 摘要：【目的】获得零转座背景的基于家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori Nucleopolyhedrovirus, BmNPV) Bac-to-Bac 系统，为高效经济构建重组BmNPV在家蚕体内表达目标蛋白提供新系统。【方法】利用R6Kγ作为复制子构建新的条件复制型杆状病毒转移载体pRADM，同时封闭BmNPV-Bacmid（BmBacmid）宿主菌（Escherichia coli BmDH10Bac）的Tn7转座受体位点attTn7，获得新的封闭型宿主菌E.coli BmDH10Bac△Tn7。【结果】由于pRADM无法在宿主菌E.coli BmDH10Bac中复制，封闭了attTn7位点的宿主菌也不能再和BmBacmid竞争与转移载体的重组，显著提高了转座效率。封闭宿主菌的attTn7位点，能使转座效率提高近4倍，使用条件复制型转座载体pRADM时，转座效率提高近10倍。而用pRADM转座E.coli BmDH10Bac△Tn7时，转座阳性率为100％。避免了获得重组病毒DNA的鉴定程序，缩短了获得重组蛋白所需时间。用携带红色荧光蛋白基因DsRed的重组质粒pRADM-Red转座E.coli BmDH10Bac△Tn7，获得重组BmBacmid转染BmN细胞，红色荧光蛋白在细胞中得到高效表达。【结论】结果表明pRADM和E.coli BmDH10Bac△Tn7是一种零背景高效构建重组BmNPV的新系统。 |
| 关 键 词： | 关键词：条件复制子；零背景转座；重组家蚕核型多角体病毒 |
| 收稿时间： | 2008-12-16 |
| 修稿时间： | 2009-03-11 |
Construction of recombinant Bombyx mori Nucleopolyhedrovirus by zero background Tn7 transposition |
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| Lunguang Yao,Hongling Zhang,Juan Feng,Erhui Zhang and Zhenzhong Wen. Construction of recombinant Bombyx mori Nucleopolyhedrovirus by zero background Tn7 transposition[J]. Acta microbiologica Sinica, 2009, 49(6): 831-837 | |
| Authors: | Lunguang Yao Hongling Zhang Juan Feng Erhui Zhang Zhenzhong Wen |
| Abstract: | |
| Keywords: | Keywords: conditional replication origin zero background transposition recombinant Bombyx mori Nucleopolyhedrovirus |
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