RNAi介导的Nrf2表达下调对亚砷酸钠诱发的小鼠胰岛β细胞毒性损伤的影响

目的探讨用RNA干扰技术下调核转录因子Nrf2的表达，对亚砷酸钠诱发的小鼠胰岛口细胞毒性损伤的影响。方法将针对Nrf2和非针对阴性对照的shRNA慢病毒颗粒稳定转染至小鼠胰岛β细胞MIN6，利用Real—time PCR和Western Blot检测细胞的Nrf2的表达，筛选Nrf2基因沉默（Nrf2-KD）和阴性对照（Scr）的细胞；应用4μmol／L亚砷酸钠（NaAsO2）作用于Nrf2-KD和Scr细胞24h，通过光学显微镜观察细胞的形态和贴壁数量的改变；四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞生长情况；利用Western Blot检测细胞内cleaved—caspase-3蛋白的表达。结果成功建立稳定转染的Nrf2基因沉默的小鼠胰岛8细胞系MIN6，与Scr细胞相比，Nrf2-KD细胞的Nrf2基因和蛋白表达水平显著降低。4μmol／L亚砷酸钠暴露24h后，与Scr细胞相比，Nrf2-KD细胞贴壁数量、细胞体积、细胞生长活性都显著下降，而细胞内的cleaved—caspase-3蛋白表达明显升高。结论Nrf2基因沉默的小鼠胰岛口细胞对亚砷酸钠暴露诱发的细胞毒性损伤更敏感。