| 人CCL20基因打靶载体的构建与鉴定 |
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| 引用本文： | 王勇,彭代智,董征学,张伟,周新,王丽华,刘敬.人CCL20基因打靶载体的构建与鉴定[J].现代生物医学进展,2009,9(1). |
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| 作者姓名： | 王勇 彭代智 董征学 张伟 周新 王丽华 刘敬 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展规划(973计划) |
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| 摘 要： | 目的:构建针对人CC亚族趋化因子配体20(CC chemokine ligand 20,CCL20)基因外显子2的置换型打靶栽体.方法:设计和合成引物,利用长距离聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)从永生化人角质形成细胞系(HaCaT)基因组DNA中克隆出CCL20基因组DNA片段,再以CCL20基因为模板扩增出长度为1969 bp的同源短臂和2356 bp的同源长臂.分别插入pioxP栽体的Neo基因上游和下游,构建针对人CCL20基因外显子2的置换型打靶载体(ploxP-hCCL20).将打靶载体线性化并以电穿孔方法转移入HaCaT,观察克隆的形成.结果:经过PCR、限制性内切酶鉴定及DNA序列测定.证实该载体的两条同源臂包含人CCL20基因的外显子1、3、4及其邻近的部分内含子.结论:ploxP-hCCL20载体构建成功,增加Neo基因下游同源臂长度的策略有可能提高细胞基因敲除的同源重组率.
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| 关 键 词： | 人 CC亚族趋化因子配体20 打靶载体 序列分析 |
Construction and Identification of Human CCL20 Gene Targeting Vector |
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| WANG Yong,PENG Dai-zhi,DONG Zheng-xue,ZHANG Wei,ZHOU Xin,WANG Li-hua,LIU Jing.Construction and Identification of Human CCL20 Gene Targeting Vector[J].Progress in Modern Biomedicine,2009,9(1). |
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| Authors: | WANG Yong PENG Dai-zhi DONG Zheng-xue ZHANG Wei ZHOU Xin WANG Li-hua LIU Jing |
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