| 酸性木聚糖酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的分泌表达 |
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| 引用本文： | 李春华,李翔,马立新.酸性木聚糖酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的分泌表达[J].微生物学通报,2005,32(6):89-95. |
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| 作者姓名： | 李春华 李翔 马立新 |
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| 作者单位： | 湖北大学生命科学学院,武汉,430062 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目（No.39900003）;国家高新技术研究发展计划项目（“863”项目）（No.2001AA214161,2002AA227011）;中药生物技术湖北省重点实验室开放基金资助项目. |
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| 摘 要： | 运用“鸟枪法”克隆构建了环境微生物的基因组文库，并从中筛选得到一个酸性木聚糖酶基因，命名为xyl3，其在GenBank中的登录号为gb：AY300805。BLAST分析表明，该基因的序列同源性很低，其中仅存在很短的木聚糖酶基因的同源片段，其编码的木聚糖酶属于Glycosyl hydrolases family 10，与来源于Geobacillus stearothermophilus的intra—cellular xylanase在氨基酸水平具77％同源性。该基因经T4 DNA polymerase处理后，克隆至经限制性内切酶CpoⅠ和NotⅠ双酶切后的毕赤酵母表达载体pHBM905，获得重组质粒pHBM706。此重组质粒转化毕赤酵母GS115，经含有交联木聚糖的选择性培养平板和PCR扩增鉴定筛选得到重组毕赤酵母GS115（pHBM706）。以0．5％甲醇于28℃诱导产酶，测得重组毕赤酵母GS115（pHBM706）在诱导的第36h产酶达最高值，所产粗酶液酶活为0．177IU／mL。该酶的最适反应pH为5．5，最适反应温度为50℃。
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| 关 键 词： | “鸟枪法”克隆 基因组文库 木聚糖酶 毕赤酵母 表达 |
| 文章编号： | 0253-2654(2005)06-0089-07 |
| 收稿时间： | 02 24 2005 12:00AM |
| 修稿时间： | 04 7 2005 12:00AM |
Cloning of Acidic Xylanase Gene and Its Secretion Expression in Pichia pastoris |
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| LI Chun-Hua,LI Xiang,MA Li-Xin.Cloning of Acidic Xylanase Gene and Its Secretion Expression in Pichia pastoris[J].Microbiology,2005,32(6):89-95. |
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| Authors: | LI Chun-Hua LI Xiang MA Li-Xin |
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| Institution: | Faculty of Life Science, HuBei University, Wuhan 430062 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Shotgun cloning Genomic library Xylanase Pichia pastoris Expression |
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