荷斯坦奶牛中性粒细胞β-防御素cDNA的克隆与序列分析 |
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作者姓名: | 刘双龙 王长法 杨宏军 杨少华 阿合买提·买买提 高运东 仲跻峰 |
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作者单位: | 山东省农业科学院奶牛研究中心,济南,250100;新疆农业大学动物医学学院,乌鲁木齐,830052;山东省农业科学院奶牛研究中心,济南,250100;新疆农业大学动物医学学院,乌鲁木齐,830052 |
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基金项目: | 山东省中青年科学家基金项目(No.2006BS06010),山东省农科院青年基金项目(No.2005YQ036) |
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摘 要: | 为研发牛β-防御素生物制剂,防治奶牛乳腺炎。根据已发表的牛β-防御素基因序列设计一对引物。收集患乳腺炎奶牛乳静脉血液中性粒细胞,用试剂盒提取总RNA。经RT-PCR扩增牛β-防御素cDNA片段,回收纯化PCR产物,连接pMD18-T载体,转化感受态细胞JM109。在含X-Gal、Amp及IPTG的LB平板上筛选阳性克隆,经菌落PCR及双酶切鉴定后,对目的片段进行测序。结果表明RT-PCR扩增出的cDNA片段碱基数为189bp,含有一个完整的ORF,能编码63个氨基酸的多肽,多肽中含6个保守半胱氨酸残基。用Blast程序进行检索比较,表明扩增序列与GenBank中发表的BNBD-7编码区序列96.3%相同。结果成功克隆出奶牛β-防御素家族的成员BNBD-7基因,为重组牛β-防御素的开发奠定了基础。
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关 键 词: | β-防御素 克隆 牛 |
文章编号: | 0250-3263(2007)05-101-05 |
修稿时间: | 2007-02-08 |
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