细胞周期蛋白E siRNA真核表达载体的构建与鉴定

目的 构建细胞周期蛋白E（CyclinE）小干扰RNA（siRNA）的真核表达载体，并检测其抑制乳腺癌细胞株MCF-7中CyclinE表达的效果。方法根据基因文库中Cyclin E的cDNA序列，设计并合成两段siRNA，分别转入到pGENESIL-1质粒中，并对重组质粒（命名为pGENESIL／CyclinE-1和pGENESIL／Cyclin E-2）进行测序鉴定。脂质体介导下转染MCF-7细胞株，RT-PCR检测转染后Cyclin E的表达。结果 CyclinEsiRNA真核表达载体构建成功，测序结果显示插入片段的方向和序列与预想一致。RT-PCR检测显示Cyclin E的表达显著降低。结论 Cyclin E siRNA真核表达载体的成功构建为进一步研究以Cyclin E为靶位点对乳腺癌进行基因治疗奠定了重要的实验基础。