宫颈癌相关BLCAP基因的原核表达及条件优化 |
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作者姓名: | 解庭波 俞娟 左泽华 赵旻 伍欣星 |
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作者单位: | [1]武汉大学医学院病毒学研究所分子病毒学研究室,武汉市430071 [2]长江大学医学院微生物与免疫学教研室湖北省,荆州市434000 |
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摘 要: | 目的利用大肠埃希菌表达系统表达宫颈癌相关BLCAP基因,并优化表达条件。方法利用PCR技术从逆转录病毒重组载体pL(BLCAP)SN中扩增宫颈癌相关BLCAP基因,将其插入到原核表达载体pET-32(a)中,从而构建原核表达重组质粒pET-32(a)-BLCAP,随后将阳性重组质粒转化到表达宿主菌中,通过IPTG诱导表达并优化表达条件,所表达的带有His标签目的融合蛋白经Ni^2+亲和层析纯化回收,并采用SDS—PAGE和Western印迹对目的蛋白进行分析和鉴定。结果构建的重组表达质粒经PCR、酶切和DNA测序鉴定与预期的结果一致,含有重组质粒的表达宿主菌经过IPTG诱导表达了分子量约为28ku的融合蛋白,并经优化确定了最佳的诱导表达条件。结论成功构建了pET-32(a)-BLCAP原核表达质粒,表达并经纯化得到了BLCAP目的蛋白,为研究该蛋白的性质及其制备针对该蛋白的抗体奠定了基础。
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关 键 词: | 宫颈癌 BLCAP基因 原核表达 条件优化 |
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