| 基于半理性设计提高疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶催化特异性 |
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| 引用本文： | 马亚迪,尤翠萍,张国强,李江华,堵国成.基于半理性设计提高疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶催化特异性[J].生物工程学报,2023,39(8):3481-3493. |
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| 作者姓名： | 马亚迪 尤翠萍 张国强 李江华 堵国成 |
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| 作者单位： | 江南大学 未来食品科学中心, 江苏 无锡 214122;江南大学 粮食发酵与食品生物制造国家工程研究中心, 江苏 无锡 214122;江南大学生物工程学院, 江苏 无锡 214122;江南大学 未来食品科学中心, 江苏 无锡 214122;江南大学生物工程学院, 江苏 无锡 214122 |
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| 基金项目： | 江苏省自然科学基金(BK20202002) |
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| 摘 要： | 甘油二酯(diacylglycerol,DAG)是油脂代谢的中间产物,在人体中具有重要的生理功能,主要通过脂肪酶水解油脂制备。但对1,2-甘油二酯(1,2-diacylglycerol,1,2-DAG)、1,3-甘油二酯(1,3-diacylglycerol,1,3-DAG)的检测分离方法及脂肪酶的催化特异性的研究较少,限制了其广泛应用。基于以上问题,本研究首先通过超临界流体色谱与蒸发光散射检测器联用,优化检测分析参数,建立了1,2-DAG(0.025–0.200 g/L)和1,3-DAG(0.025–0.150 g/L)的高效定量检测方法。进一步基于疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶(Thermomyces lanuginosus lipase,TLL)与三油酸甘油酯的分子对接,挑选了5个潜在底物结合位点并通过定点饱和突变构建了突变体库,利用超临界流体色谱方法对突变体催化特异性进行筛选。突变文库中I202V表现出最高的1,3-位置选择特异性,较野生型TLL提高了11.7%。本文基于半理性设计方法实现了对TLL位置催化特异性的改造,并建立了一种能够高效分离检测DAG位置异构体的方法,为脂肪酶催化特异性研究提供了参考。
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| 关 键 词： | 脂肪酶 甘油二酯 半理性设计 超临界流体色谱 位置异构体 |
| 收稿时间： | 2022/12/12 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2023/2/1 0:00:00 |
Improving the position specificity of Themomyces lanuginosus lipase based on semi-rational design |
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| MA Yadi,YOU Cuiping,ZHANG Guoqiang,LI Jianghu,DU Guocheng.Improving the position specificity of Themomyces lanuginosus lipase based on semi-rational design[J].Chinese Journal of Biotechnology,2023,39(8):3481-3493. |
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| Authors: | MA Yadi YOU Cuiping ZHANG Guoqiang LI Jianghu DU Guocheng |
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| Institution: | Science Center for Future Foods, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China;National Engineering Research Center for Cereal Fermentation and Food Biomanufacturing, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China;School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China;Science Center for Future Foods, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China;School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | lipase diglycerol semi-rational design supercritical fluid chromatography position isomerism |
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