| 抗鸡白细胞介素4单克隆抗体的制备及鉴定 |
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| 引用本文： | 关晓宇,徐志超,王永强,李晓齐,曹红,郑世军. 抗鸡白细胞介素4单克隆抗体的制备及鉴定[J]. 生物工程学报, 2017, 33(1): 44-54 |
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| 作者姓名： | 关晓宇 徐志超 王永强 李晓齐 曹红 郑世军 |
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| 作者单位： | 中国农业大学 动物医学院 农业生物技术国家重点实验室，北京 100193,中国农业大学 动物医学院 农业生物技术国家重点实验室，北京 100193,中国农业大学 动物医学院 农业生物技术国家重点实验室，北京 100193,中国农业大学 动物医学院 农业生物技术国家重点实验室，北京 100193,中国农业大学 动物医学院 农业生物技术国家重点实验室，北京 100193,中国农业大学 动物医学院 农业生物技术国家重点实验室，北京 100193 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金 (Nos. 31272543, 31430085)，现代农业产业技术体系建设专项资金 (No. NYCYTX-41) 资助。 |
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| 摘 要： | 为了制备鸡白细胞介素4(chIL-4)单克隆抗体,将成熟的chIL-4基因亚克隆至原核表达载体pET-28a和pGEX-6P-1上,然后在大肠杆菌中分别诱导重组蛋白His-chIL-4和GST-chIL-4的表达,并纯化。将纯化后的His-chIL-4作为免疫原免疫BALB/c小鼠,经4次免疫后,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合。将纯化后的GST-chIL-4作为筛选抗原,利用间接ELISA筛选阳性克隆。阳性细胞株经3次亚克隆后,获得3株稳定分泌抗chIL-4蛋白的杂交瘤细胞株,分别命名为1G11-3B、2E5-3D和1G11-5H。经ELISA检测,3株单克隆抗体的亚型均为IgG1,亲和力解离常数(Kd)分别为1.79×10~(–9)、1.61×10~(–9)和2.36×10~(–9)。经Western blotting及间接免疫荧光试验鉴定,3株单克隆抗体均能特异性识别原核和真核表达的chIL-4蛋白。Western blotting试验证明1G11-3B、2E5-3D和1G11-5H识别的抗原表位区域分别为chIL-4蛋白N端的第1–40、80–112和40–80位氨基酸。该单克隆抗体的制备为chIL-4的检测和生物学功能研究奠定了基础。
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| 关 键 词： | 鸡白细胞介素4，原核表达，单克隆抗体 |
| 收稿时间： | 2016-06-06 |
Generation and characterization of monoclonal antibodies against chicken interleukin 4 |
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| Xiaoyu Guan,Zhichao Xu,Yongqiang Wang,Xiaoqi Li,Hong Cao and Shijun Zheng. Generation and characterization of monoclonal antibodies against chicken interleukin 4[J]. Chinese journal of biotechnology, 2017, 33(1): 44-54 |
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| Authors: | Xiaoyu Guan Zhichao Xu Yongqiang Wang Xiaoqi Li Hong Cao Shijun Zheng |
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| Affiliation: | State Key Laboratory of Agrobiotechnology, College of Veterinary Medicine, China Agricultural University, Beijing 100193, China,State Key Laboratory of Agrobiotechnology, College of Veterinary Medicine, China Agricultural University, Beijing 100193, China,State Key Laboratory of Agrobiotechnology, College of Veterinary Medicine, China Agricultural University, Beijing 100193, China,State Key Laboratory of Agrobiotechnology, College of Veterinary Medicine, China Agricultural University, Beijing 100193, China,State Key Laboratory of Agrobiotechnology, College of Veterinary Medicine, China Agricultural University, Beijing 100193, China and State Key Laboratory of Agrobiotechnology, College of Veterinary Medicine, China Agricultural University, Beijing 100193, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | chicken interleukin 4 prokaryotic expression monoclonal antibody |
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