慢病毒导入型人白细胞介素10基因表达质粒的构建及其对CCI大鼠的镇痛作用

目的：构建含人白细胞介素10基因的慢病毒载体LV-hIL-10，观察鞘内注射LV—hIL-10对坐骨神经松结扎模型（chronic constriction injury，CCI）大鼠的镇痛作用。方法：应用PCR从pCYIL-10质粒上扩增hIL-10基因，把hIL-10基因亚克隆至pWPXL质粒上得到重组质粒pWPXL-hIL-10，将pWPXL-hIL-10与psPAX2、pMD2．G共转293T，收集上清浓缩后制备LV-hIL-10。同时将空质粒pWPXL-GFP与psPAX2、pMD2．G共转293T，收集上清浓缩后作实验对照。纯种健康清洁级成年雄性SD大鼠135只，随机分为9组：CCI疼痛模型4组（C0、C1、C2、C3），假手术4组（S0、S1、S2、S3）和正常对照组（N组）。给药组在蛛网膜下腔分别注射LV-hIL-10（C1组、S1组）、LV-GFP（C2组、S2组）、生理盐水（C3组、S3组），对照组C0组、S0组不做鞘内置管，不给药。各组在手术造模成功实施鞘内注射后观察LV-hIL-10组不同时间点痛阈的改变及脊髓、脑皮质、海马中的hIL-10mRNA和蛋白表达。结果：获得IL—10基因片段，成功重组pWPXL-hIL-10载体，经序列验证无误。质粒共转染293T细胞后，获得了高滴度（2×10^10）、高纯度的LV-hIL-10病毒颗粒。CCI大鼠鞘内注射LV-hIL-10后痛觉异常明显缓解，脊髓、脑皮质、海马中的IL-10表达上调，脊髓中IL-10表达上调最显著。结论：鞘内注射慢病毒感染导入型人IL-10表达质粒对CCI大鼠有明显镇痛效应。

The Construction of Lentiviral-delivery Human Interleukin-10 Expression Vector and the Abirritative Effect of Pain on CCI Rats