抗人VEGF受体Ⅱ基因Ⅲ区单链抗体基因的构建和表达 |
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作者姓名: | 李容 熊冬生 邵晓枫 许元富 刘嘉 朱祯平 杨纯正 |
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作者单位: | 中国医学科学院/中国协和医科大学,血液学研究所实验血液学国家重点实验室,天津,300020 |
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基金项目: | 国家攀登计划资助 ( 95 专 1 0 ),天津市重大科技攻关经费资助 (No .0 0 31 1 951 1 )~~ |
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摘 要: | 采用RT-PCR技术从分泌抗人血管内皮生长因子受体Ⅱ(kinase insert domaincontaining receptor,KDR)基因Ⅲ区单克隆抗体Ycom1D3的杂交瘤细胞中克隆出VH和VL可变区基因,通过重叠延伸拼接(spliceoverlap extension)PCR方法在VH和VL基因之间引入柔性短肽(Gly4Ser)3,体外构建Ycom1D3单链抗体基因Ycom1D3-ScFv),将其克隆至pAYZ表达载体,在大肠杆菌中表达。SDS-PAGE和Westernblot分析结果表明,Ycom1D3-ScFv在E.coli 16C9中获得表达,重组蛋白的相对分子量为30kD,与预期结果一致。表达产物主要以不溶性包涵体形式存在,经过溶解包涵体,TALON 金属亲合层析基质(TALON metal affinity resin)纯化和体外复性过程,获得了高纯度的单链抗体片段。流式细胞分析结果证实该单链抗体可与人脐静脉内皮细胞结合,保留了鼠源单抗与KDR抗原的特异性结合活性。抗KDRⅢ单链抗体基因Ycom1D3-ScFv的成功构建和功能性表达为靶向诊断治疗及进一步基因工程改造奠定了基础。
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关 键 词: | 血管内皮生长因子, KDR, 单链抗体(ScFv) 原核表达 |
文章编号: | 1000-3061(2004)02-0187-05 |
修稿时间: | 2003-07-28 |
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