| 基于易错PCR技术的短小芽孢杆菌YZ02脂肪酶基因BpL的定向进化 |
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| 引用本文： | 黄瑛,蔡勇,杨江科,闫云君. 基于易错PCR技术的短小芽孢杆菌YZ02脂肪酶基因BpL的定向进化[J]. 微生物学报, 2008, 24(3): 445-451 |
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| 作者姓名： | 黄瑛 蔡勇 杨江科 闫云君 |
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| 作者单位： | 分子生物物理教育部重点实验室, 华中科技大学生命科学与技术学院, 武汉 430074;分子生物物理教育部重点实验室, 华中科技大学生命科学与技术学院, 武汉 430074;分子生物物理教育部重点实验室, 华中科技大学生命科学与技术学院, 武汉 430074;分子生物物理教育部重点实验室, 华中科技大学生命科学与技术学院, 武汉 430074 |
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| 基金项目： | 国家十一五“863”计划(No. 2006AA020203, No. 2007AA05Z417)和武汉市攻关计划(No. 200720422138)资助。 |
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| 摘 要： | 利用易错PCR技术对短小芽胞杆菌(Bacillus pumilus)YZ02脂肪酶基因BpL进行两轮定向进化研究, 分别获得最佳突变株BpL1-7和BpL2-1369, 其脂肪酶活力比出发酶分别提高了2倍和6倍。序列分析表明, 突变体BpL2-1369有4个碱基发生了突变: T61C/C147T/A334G/T371A, 其中有3个碱基突变导致了氨基酸的改变。通过SWISS-MODEL数据库模拟脂肪酶的结构显示, 3个突变氨基酸分别位于第1个a螺旋的第3个氨基酸、第4和第5个b折叠之间的转角以及第5个b折叠的第1个氨基酸位置。将野生型脂肪酶基因BpL和进化后的基因BpL2-1369的高效表达产物经Ni-Agarose柱和Sephadex-G75纯化后, 酶学性质测定表明: 突变脂肪酶的比活力比野生型脂肪酶提高了1.31倍, Km值由8.24 mmol/L降低至7.17 mmol/L; 在pH>8.0时的稳定性较野生型脂肪酶有所提高。
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| 关 键 词： | 短小芽胞杆菌 脂肪酶 定向进化 易错PCR |
| 收稿时间： | 2007-07-06 |
Directed Evolution of Lipase of Bacillus pumilus YZ02 by Error-prone PCR |
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| Ying Huang,Yong Cai,Jiangke Yang and Yunjun Yan. Directed Evolution of Lipase of Bacillus pumilus YZ02 by Error-prone PCR[J]. Acta microbiologica Sinica, 2008, 24(3): 445-451 |
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| Authors: | Ying Huang Yong Cai Jiangke Yang Yunjun Yan |
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| Affiliation: | Key Laboratory of Molecular Bio-physics, College of Life Science and Technology, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430074, China;Key Laboratory of Molecular Bio-physics, College of Life Science and Technology, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430074, China;Key Laboratory of Molecular Bio-physics, College of Life Science and Technology, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430074, China;Key Laboratory of Molecular Bio-physics, College of Life Science and Technology, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430074, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Bacillus pumilus lipase directed evolution error-prone PCR |
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