| 融合双亲短肽提高腈水合酶的热稳定性研究 |
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| 引用本文： | 房月芹,崔文璟,刘义,周丽,刘中美,周哲敏. 融合双亲短肽提高腈水合酶的热稳定性研究[J]. 微生物学杂志, 2015, 0(5): 13-18 |
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| 作者姓名： | 房月芹 崔文璟 刘义 周丽 刘中美 周哲敏 |
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| 作者单位： | 江南大学 环境与土木工程学院，江苏 无锡 214122;江南大学 生物工程学院 工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 214122;江南大学 生物工程学院 工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 214122;江南大学 生物工程学院 工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 214122;江南大学 生物工程学院 工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 214122;江南大学 生物工程学院 工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 214122 |
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| 基金项目： | 国家863计划项目（2014AA021304）；国家自然科学基金项目（31400058）；江苏省自然科学基金（青年基金）项目（BK20130139） |
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| 摘 要： | 腈水合酶(Nitirle hydratase, NHase)催化腈类物质转化为酰胺类物质，目前用于工业生产丙烯酰胺。但在催化过程中释放的热量易导致酶分子失活。研究通过蛋白质融合技术对腈水合酶进行分子改造，提高热稳定性。将2种双亲自组装肽（self-assembling peptides, SAPs）EAK16和ELK16分别融合至恶臭假单胞菌Pseudomonas putida NRRL-18668来源NHase非催化亚基β的N末端，构建出2种融合型NHase：EAK16-NHase和ELK16-NHase。经过表达、纯化后测定酶活力，发现EAK16-NHase和ELK16 NHase的酶活力分别为(426±14) U/mg和(372±12) U/mg，保留野生型酶活力的97%和85%。在50 ℃条件下孵育0~60 min，每5 min取样后测定残存酶活力，EAK16-NHase和ELK16-NHase酶活力半衰期（T50）分别为35 min和40 min，野生型NHase为20 min。说明融合EAK16和ELK16均能提高NHase的热稳定性。研究表明融合SAPs能在不显著影响酶活力的条件下提高酶的热稳定性。
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| 关 键 词： | 双亲短肽；融合蛋白；腈水合酶；酶催化；热稳定性 |
Enhancement of Nitrile Hydratase by Translational Fusion of Amphiphilic Short Peptide |
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| FANG Yue-qin,CUI Wen-jing,LIU Yi,ZHOU Li,LIU Zhong-mei and ZHOU Zhe-min. Enhancement of Nitrile Hydratase by Translational Fusion of Amphiphilic Short Peptide[J]. Journal of Microbiology, 2015, 0(5): 13-18 |
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| Authors: | FANG Yue-qin CUI Wen-jing LIU Yi ZHOU Li LIU Zhong-mei ZHOU Zhe-min |
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| Affiliation: | Schl. of Envir''t & Civil Engin.,;Schl. of Biotech., Key Lab. of Indust. Biotech., Jiangnan Uni., Wuxi 214122;Schl. of Biotech., Key Lab. of Indust. Biotech., Jiangnan Uni., Wuxi 214122;Schl. of Biotech., Key Lab. of Indust. Biotech., Jiangnan Uni., Wuxi 214122;Schl. of Biotech., Key Lab. of Indust. Biotech., Jiangnan Uni., Wuxi 214122;Schl. of Biotech., Key Lab. of Indust. Biotech., Jiangnan Uni., Wuxi 214122 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | amphiphilic short peptide fused protein Nitrile hydrase enzyme catalysis thermo stability |
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