EGCG干预LMP1激活的NF-κB信号转导通路中的靶分子

为阐明在鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma, NPC)细胞中茶多酚干预EB病毒潜伏膜蛋白1(latent membrane protein 1，LMP1)激活的NF-κB信号转导通路中的靶分子，采用EBV阴性及阳性的鼻咽癌细胞系CNE1和CNE1-LMP1细胞，利用噻唑蓝(MTT)法，观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对CNE1和CNE1-LMP1细胞生存率的影响.采用瞬间转染及报道基因法观察EGCG对NF-κB活性的作用.利用间接免疫荧光法，观察EGCG对NF-κB（p65）核移位的影响，再分别提取CNE1和CNE1-LMP1的胞浆及胞核蛋白，通过蛋白质印迹分析EGCG抑制NF-κB（p65）的核移位后胞浆及胞核蛋白中NF-κB（p65）的变化.采用蛋白质印迹分析EGCG对IκBα的磷酸化水平的影响.采用瞬间转染及报道基因法观察EGCG对EGFR启动子活性的影响，并用蛋白质印迹分析EGCG对EGFR自身磷酸化的作用.结果表明EGCG对鼻咽癌细胞的抑制作用有剂量依赖性，并可抑制NF-κB的活性.EGCG能抑制 NF-κB（p65）的核移位，并抑制IκBα的磷酸化.EGCG对NF-κB信号通路下游的靶基因EGFR的启动子活性及自身磷酸化都有抑制作用.由上述结果可以推断，EGCG对信号转导通路上的NF-κB、NF-κB（p65）、IκBα、EGFR多个靶点分子具有干预作用.LMP1是EB病毒编码的蛋白质，因此，EGCG抑制与病毒相联系的信号转导通路，可能是EGCG抑制与病毒相关的肿瘤的分子机制之一.