| 基于细胞热漂移测定(CETSA)技术鉴定活细胞内药物靶标的标准操作流程 |
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| 引用本文： | 王莉,刘景芳,李维林,李二伟,孙树涛,李娟,罗元明.基于细胞热漂移测定(CETSA)技术鉴定活细胞内药物靶标的标准操作流程[J].微生物学报,2023,63(6):2488-2501. |
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| 作者姓名： | 王莉 刘景芳 李维林 李二伟 孙树涛 李娟 罗元明 |
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| 作者单位： | 中国科学院微生物研究所公共技术中心, 北京 100101 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(31371445) |
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| 摘 要： | 【目的】细胞热漂移测定(cell thermal shift assay, CETSA)技术是一种检测细胞内药物(配体)和蛋白质(靶标)相互作用的技术，原理是当蛋白质结合药物后，其热稳定性会发生变化，通过测定这种变化去鉴定药物和蛋白之间的相互作用。本研究以治疗多发性骨髓瘤的靶向药帕比司他(panobinostat)为例，建立基于蛋白印迹杂交(Western blotting)和CETSA技术的药物靶蛋白鉴定的标准操作流程。【方法】首先用药物panobinostat处理培养的K562细胞，然后加热处理细胞、裂解细胞及提取可溶性蛋白，以及用抗靶蛋白的抗体经Western blotting定量可溶性蛋白。【结果】经Western blotting定量及曲线拟合，成功得到3个蛋白——组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC1)、人突触蛋白(humansyntaxin-4,STX4)以及四三肽重复结构域(tetratricopeptiderepeat domain38,TTC38)随温度变化的热熔解曲线和恒定温度条件下的药物剂量反应曲线。【结论】HDAC1、STX4及T...
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| 关 键 词： | 细胞热漂移测定 活细胞 蛋白印迹杂交 药物靶标鉴定 |
| 收稿时间： | 2022/9/16 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2023/2/8 0:00:00 |
A standard operating procedure for identification of drug targets in living cells based on cell thermal shift assay (CETSA) |
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| WANG Li,LIU Jingfang,LI Weilin,LI Erwei,SUN Shutao,LI Juan,LUO Yuanming.A standard operating procedure for identification of drug targets in living cells based on cell thermal shift assay (CETSA)[J].Acta Microbiologica Sinica,2023,63(6):2488-2501. |
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| Authors: | WANG Li LIU Jingfang LI Weilin LI Erwei SUN Shutao LI Juan LUO Yuanming |
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| Institution: | Institutional Center for Shared Technologies and Facilities, Institute of Microbiology, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100101, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | cell thermal shift assay (CETSA) living cell Western blotting identification of drug targets |
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